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細胞培養(yǎng)—如何揭開細胞凍存與復蘇的秘密！
在美國科幻大片中，經常會有因為某些特殊原因被凍存起來的超人
細胞凍存操作步驟：
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基
2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化;
3.待消化到位后加入適量血清或*培養(yǎng)基終止消化
4.配制凍存液
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜
6.凍存細胞后應取出一管復蘇，檢測細胞的存活率
細胞凍存注意事項：
1.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細胞比較珍貴
，可以調整為血清：DMSO=9:1;2.如果沒有程序降溫盒
，可以將凍存細胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，再轉至液氮罐內;3.凍存細胞儲存在-80度中通常不建議超過半年
，液氮中通常不建議超過2年;4.細胞如果是次養(yǎng)，建議至少凍存兩個批次以上
，以盡量避免因為凍存問題導致細胞絕種;細胞復蘇操作步驟：
1.準備工作：開啟恒溫水浴鍋
，將溫度調節(jié)在37℃，取一離心管，加入5ml細胞培養(yǎng)基;2.取出凍存管
，立即放入水浴鍋中快速搖晃，讓凍存液迅速融化;3.打開凍存管
，將凍存液小心轉移到預先加入有培養(yǎng)基的離心管中，800rpm離心5分鐘;4.小心棄掉上清，加入約5ml培養(yǎng)基重懸細胞;
5.將所得細胞懸液轉移入培養(yǎng)瓶中
，蓋上瓶塞，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察細胞的狀態(tài);
