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。在有條件的實(shí)驗(yàn)室，要對每一批小牛血清和長期傳代培養(yǎng)的細(xì)胞系進(jìn)行支原體的檢查，查出污染源應(yīng)及時(shí)采取措施處理。對于污染的雜交瘤細(xì)胞可以采取生物學(xué)的過濾方法，將污染的雜交瘤細(xì)胞注射于BALB/c小鼠的腹腔，待長出腹水或?qū)嶓w瘤時(shí)，取出分離雜交瘤細(xì)胞，一般可除去支原體污染。

2

、融合后雜交瘤不生長

在保證融合技術(shù)沒有問題的前提下主要考慮下列因素：

(1)牛血清的質(zhì)量太差

，用前沒有進(jìn)行嚴(yán)格篩選;

(2)HAT有問題，主要是A含量過高或HT含量不足;

(3)骨髓瘤細(xì)胞污染了支原體;

(4)EG有毒性或作用時(shí)間過長

。

3

、雜交瘤細(xì)胞不分泌抗體或停止分泌抗體

融合后有細(xì)胞生長，但無抗體產(chǎn)生

，可能是HAT中A失效或骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生突變，變成A抵抗細(xì)胞所致。有可能是免疫原抗原性弱，免疫效果不好。對于原分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞變?yōu)殛幮裕赡苁羌?xì)胞支原體污染，或非抗體分泌細(xì)胞克隆競爭性生長，從而抑制了抗體分泌細(xì)胞的生長。也可能發(fā)生染色體丟失。之前提出的“三要”“三不要”，可能是防止抗體停止分泌的有效措施。

三要：

要大量保持和補(bǔ)充液氮凍存的細(xì)胞原管

。

要應(yīng)用倒置顯微鏡經(jīng)常檢查細(xì)胞的生長狀況

。

要定期進(jìn)行再克隆。

三不要：

不要讓細(xì)胞“過度生長”

。因?yàn)榉欠置诘碾s交瘤細(xì)胞將成為優(yōu)勢，壓倒分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞。

不要讓培養(yǎng)物不加檢查地任其連續(xù)培養(yǎng)幾周或幾個(gè)月。

不要不經(jīng)克隆化而使雜交瘤在機(jī)體內(nèi)以腫瘤生長形式連續(xù)傳好幾代

。

4

、雜交瘤細(xì)胞難以克隆化

可能與小牛血清質(zhì)量、雜交瘤細(xì)胞的活性狀態(tài)有關(guān)