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人白細(xì)胞介素1（IL-1）ELISA檢測(cè)試劑盒原理
試劑盒采用雙抗體步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被白細(xì)胞介素1（IL-1）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體 樣品收集 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝 3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎 5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按次用量分裝 自備物品 1.酶標(biāo)儀（450nm） 2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL 3.37℃恒溫箱 人白細(xì)胞介素1（IL-1）ELISA檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng) 1.試劑盒保存在2-8℃ 2 . 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中 3.濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白 4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作 5. 所有液體組分使用充分搖勻 試劑盒組成 名稱 96孔配置 48孔配置 備注 微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 無 標(biāo)準(zhǔn)品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無 樣本稀釋液 6mL 3mL 無 檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無 20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋 底物A 6mL 3mL 無 底物B 6mL 3mL 無 終止液 6mL 3mL 無 封板膜 2張 2張 無 說明書 1份 1份 無 自封袋 1個(gè) 1個(gè) 無 注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、7.5 試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體 5. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min 人白細(xì)胞介素1（IL-1）ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃ 2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔 3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL 4. 除空白孔外 5. 棄去液體 6. 每孔加入底物A、B各50μL 7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。 人白細(xì)胞介素1（IL-1）elisa試劑盒性能 1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。 2.靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。 3.檢測(cè)范圍： 1.0 - 120 pg/mL。 4.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 5.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15% 6.貯藏：2-8℃ 7.有效期：6個(gè)月 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素1（IL-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。、處理及保存方法，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。、2-20uL、20-200uL、200-1000uL，使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。，密封（低溫干燥）保存。；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，*終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。。。 、15 、30、60 、120 pg/mL ，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干 ，如此洗板5次 。 ，洗板5次 。 。 ，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL； ，再加樣本稀釋液40μL ；空白孔不加。，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。，37℃避光孵育15min。
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，避光防潮保存
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