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人血栓前體蛋白(TPP)ELISA試劑盒技術(shù)說明書
本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人血栓前體蛋白(TPP)的含量
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人血栓前體蛋白(TPP)水平
人血栓前體蛋白(TPP)試劑盒 試劑盒組成:
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 |
|
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
|
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
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酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品2250μg/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘
,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后
,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)
。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí)
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后
,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?div id="d48novz" class="flower left">6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取
,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性
。人血栓前體蛋白(TPP)ELISA試劑盒 試劑盒組成:
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在
、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑
,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘
。4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用
。5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體
,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl
,空白孔除外。7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl
10. 終止:每孔加終止液50μl
11. 測定:以空白空調(diào)零
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性
4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔
5. 封板膜只限一次性使用
6. 底物請避光保存
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9. 本試劑不同批號組分不得混用
。10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)
。計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式
倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度
(此圖僅供參考)
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%
檢測范圍:
50μg/L -2000μg/L
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月
技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖