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大鼠凝血因子Xa(FXa)elisa試劑盒技術(shù)原理
試驗原理：
大鼠凝血因子Xa(FXa)是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測
內(nèi)容及其配制
自備材料
1)蒸餾水
2)加樣器：5ul、10ul
3)大鼠凝血因子Xa(FXa)ELISA試劑盒振蕩器及磁力攪拌器等
。安全性
1)避免直接接觸終止液和底物A
、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2)實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品
。3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份
。操作注意事項
1)試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫
。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。2)實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中
，密封保存，以免變質(zhì)。3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好
。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4)使用一次性的吸頭以免交叉污染
，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液
。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品6)洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水
7)底物A應(yīng)揮發(fā)
8)加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣
9)按照說明書中標明的時間
樣品收集
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽
3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎
5)保存------如果樣品不立即使用
試劑的準備:
1)標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存
。稀釋前將標準品振蕩混勻2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟:
1)使用前
2)根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔
3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔
4)甩去孔內(nèi)液體
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP
6)甩去孔內(nèi)液體
7)每孔加入底物A、B各50ul
8)取出酶標板
9)在450nm波長處測定各孔的OD值
局限:
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的
大鼠凝血因子Xa(FXa)ELISA試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)
3. 重復性：板內(nèi)
結(jié)果判斷與分析
1
2
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