,熒光強(qiáng)度對(duì)比
So
,假如你正在使用的是頂讀 qPCR 儀,那么安利一下
,不妨用白管試試哦~
質(zhì)量(是否干凈)這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量的重要性
。qPCR 耗材必須保證沒(méi)有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和 DNA 酶
,但不能去除灰塵和 DNA 殘留
,它們可能會(huì)抑制 PCR 反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。物質(zhì)是具有吸光度的
,即便是很小的污染物也會(huì)吸收反應(yīng)體系中的熒光
,影響熒光信號(hào)的采集。用一個(gè)夸張版的實(shí)驗(yàn)來(lái)演示一下雜質(zhì)污染對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響
,在BUNSEN本生八聯(lián)排的一個(gè)反應(yīng)孔中放入一粒雜質(zhì)
,不出所料,擴(kuò)增結(jié)果曲線出現(xiàn)了顯著的異常
。
↑ 8 復(fù)孔重復(fù)性反應(yīng)結(jié)果
,左邊孔中的雜質(zhì)讓曲線“跑偏"
Tips 注意不要讓耗材長(zhǎng)期暴露在空氣中,取出耗材后
,一定要快速封好包裝袋
,避免用裸手接觸。有條件的話
,可在超凈臺(tái)中操作
。容量/尺寸/通量
容量決定了可加樣的多少(反應(yīng)體積)。加樣過(guò)多會(huì)導(dǎo)致熱傳導(dǎo)效率下降
,溢出或交叉污染;而加樣不足會(huì)引起樣品蒸發(fā)損耗
。qPCR 儀的加熱模塊也會(huì)決定可適配的耗材和適用的反應(yīng)體系大小。通量很容易理解
,就是單次實(shí)驗(yàn)多能上多少個(gè)樣品
。常見(jiàn)的容量和通量規(guī)格如下表所示
單管/八聯(lián)排 0.2mL、0.1mL


96 孔板 0.2mL
、0.1mL


384 孔板 0.02mL


容量規(guī)格也常用標(biāo)準(zhǔn)和低容量來(lái)區(qū)分
。low profile(低容)耗材的高度更低
,這種短小設(shè)計(jì)地減少了反應(yīng)體系上方的空間(“死體積"——無(wú)用部分)
,降低熱循環(huán)過(guò)程中的蒸發(fā)影響,同時(shí)能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹
,提高熱傳導(dǎo)效率
。因此
,低容管也被稱(chēng)為“快速"管或板。
Tips 常見(jiàn)的反應(yīng)體積一般為 20 µL
,推薦使用 0.1 mL 或 low profile 的低容反應(yīng)管
。管壁厚度
PCR 耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的熱傳導(dǎo)
。超薄管壁較標(biāo)準(zhǔn)版薄 50%
,可進(jìn)一步減少熱屏障,帶來(lái)更快更好的反應(yīng)效果
。當(dāng)然
,建議選超薄的。
透明度 qPCR 的管蓋和封膜需要具有很高的光學(xué)透性
,確保的熒光信號(hào)的穿透和傳遞
,減少失真(針對(duì)頂讀 qPCR 儀)。管壁的透明度越高反倒會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
,理由在前面解釋過(guò)
。傳統(tǒng) PCR 可忽略此特點(diǎn)。裙邊 PCR 板的裙邊指的是板的周?chē)由觳糠?div id="d48novz" class="flower left">
。額.......這個(gè)裙邊作用是在構(gòu)建反應(yīng)體系時(shí)為移液過(guò)程提供穩(wěn)定性支撐
,以及結(jié)合自動(dòng)化工作站時(shí)提供機(jī)械強(qiáng)度和抓手。常見(jiàn)的有三種:無(wú)裙邊
、半裙邊和全裙邊(對(duì)應(yīng)下圖 A
、B、C)
。
Tips 簡(jiǎn)單理解就是
,裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動(dòng)化批量處理提供便利
,與機(jī)械臂的結(jié)合
。在常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)室中可能不太需要,使用無(wú)裙邊板即可
。
封板膜

PCR 封板膜由透明塑料或鋁箔制成
。黏性透明薄膜比較常見(jiàn),適配于 96 或 384 孔板
,要有足夠好的光透性
。可以在封膜時(shí)用個(gè)小卡片把孔周?chē)哪壕o
,避免漏氣等現(xiàn)象
。實(shí)驗(yàn)室里的貼膜 boy 們應(yīng)該很熟悉了吧?div id="jfovm50" class="index-wrap">?梢院?jiǎn)單理解為......
黏性鋁膜可能比較少見(jiàn)
,盡管不適合 qPCR
,但對(duì)于光敏樣品是的耗材,由于可以穿刺
,便于 PCR 中樣品轉(zhuǎn)移
。(適用于傳統(tǒng) PCR)
總結(jié):耗材作為 PCR 體系的載體,對(duì)提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量是非常重要的
。 有關(guān) pcr 耗材
,八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇!?本生生物小編就分享到這了
,看完本文您就應(yīng)該有了基本的認(rèn)識(shí)和了解相信大家都明白了吧!總的來(lái)說(shuō)
,希望對(duì)大家有所幫助。