，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解
，分裝試管(裝量宜多些)
，121℃高壓滅菌15min，制成高層斜面
，冷卻后備用
。
2、挑取待檢菌的新鮮培養(yǎng)物
，穿刺接種混合克氏雙糖鐵瓊脂斜面
。接種時(shí)先在斜面劃線，然后再穿刺底層
。
3
、將試管放入培養(yǎng)箱內(nèi)36±1℃培養(yǎng)18—24h。
4
、觀察結(jié)果
。觀察斜面與底層的反應(yīng)情況。
三
、質(zhì)量控制：
配成的培養(yǎng)基為紅色
，下列菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)24h結(jié)果如下：
四、常見(jiàn)問(wèn)題：
（1）克氏雙糖鐵試驗(yàn)時(shí)間為什么要控制在18-24h
？KIA時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)怎樣,短了會(huì)怎樣
？
答：時(shí)間短了細(xì)菌發(fā)酵不夠充分,現(xiàn)象不明顯。時(shí)間長(zhǎng)了細(xì)菌發(fā)酵過(guò)度,因?yàn)镵IA是利用酸堿指示劑顯色的
，時(shí)間長(zhǎng)了自然會(huì)引起一些改變而影響判斷
，同時(shí)各種副反應(yīng)也會(huì)造成很大影響
。相對(duì)來(lái)說(shuō),時(shí)間稍微長(zhǎng)一點(diǎn)兒影響不大，但不能長(zhǎng)得太夸張
。
（2）MIU試驗(yàn),為什么大腸埃希菌培養(yǎng)24h之后
，培養(yǎng)基出現(xiàn)了氣泡？志賀菌的培養(yǎng)基就沒(méi)有
？
答：因?yàn)榇竽c埃希菌是產(chǎn)氣的,而志賀菌不產(chǎn)氣
。
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