，到底要如何裂解細(xì)胞呢?不妨來看下本生生物的詳述：
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1.融解ripa裂解液，混勻
。取適當(dāng)量的裂解液
，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入pmsf
，使pmsf的終濃度為1mm。
2.對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液
，用pbs
、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾
，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液
。用槍吹打數(shù)下
，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后
，細(xì)胞就會被裂解
。
對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散
。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液
。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀
。如果細(xì)胞量較多
，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解
。
3.充分裂解后
，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清
，即可進(jìn)行后續(xù)的page
、western和免疫沉淀等操作
。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠
，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品：
1.把組織剪切成細(xì)小的碎片
。
2.融解ripa裂解液
，混勻。取適當(dāng)量的裂解液
，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入pmsf
，使pmsf的終濃度為1mm。
3.按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液
。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液
，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量
。)
4.用玻璃勻漿器勻漿
，直至充分裂解。
5.充分裂解后
，10000-14000g離心3-5分鐘
，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的page
、western和免疫沉淀等操作
。
6.如果組織樣品本身非常細(xì)小
，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分
。然后同樣離心取上清
，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便
，不必使用勻漿器
，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注：ripa裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物
，屬正?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組dna等的復(fù)合物
。在不檢測和基因組dna結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下
，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物
，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗
。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如nf-kappab
、p53等時
，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子
。
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