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本生闡述：ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件如何選擇

更新時(shí)間：2022-11-21瀏覽：1336次

　　本生闡述：ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件如何選擇

　　使用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)

，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件

，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高

，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)

。

　　在ELISA中

，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的

，其中包括：

　　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯yixi

、聚苯y(tǒng)ixi

、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板

、試管

、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯y(tǒng)ixi凹孔板

。不管何種載體

，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)

，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性

，據(jù)此判明其吸附性能是否良好

。

　　包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間

。吸附溫度

，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1

、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后

，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值

。選擇OD值大而蛋白量少的濃度

。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。

　　除此之外還要注意以下事項(xiàng)：

　　1.確定ELISA檢測(cè)試劑盒在有效期內(nèi);

　　2.仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū);

　　3.按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全(數(shù)量

、體積);

　　4.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備

，盡量分裝做備份

。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存;

　　5.根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量;

　　6.準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品

，如試管

、吸頭、移液器

、離心機(jī)等;

　　7.按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫

，配制所需試劑。

　　適應(yīng)客戶：醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室

，中心實(shí)驗(yàn)室

，肝病中心;第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所

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，檢驗(yàn)檢疫。

　　溫馨提示：不可用于臨床治療

。

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