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BUNSEN本生——酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)操作要點(diǎn)
更新時(shí)間：2023-03-21瀏覽：947次

　　BUNSEN本生——酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)操作要點(diǎn)

　　一

、摘要：

　　1.標(biāo)本的采取和保存

　　可用作elisa測定的標(biāo)本十分廣泛，體液(如血清)

、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液
、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清
、尿液)
，有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本
。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外
，其他成份均同等于血清
。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固
、血kuai收縮后即可取得
。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本
。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集
，應(yīng)注意避免溶血
，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中
，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測
。如有細(xì)菌污染
，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)
。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合
，在間接法ELISA中可使本底加深
。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃
，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后
，蛋白質(zhì)局部濃縮
，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩
，避免氣泡，可上下顛倒混和
，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩
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；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測
。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測
，宜少量分裝冰存
。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑
。

BUNSEN本生 酶聯(lián)免疫試劑盒 天津本生

　　2.加樣

　　在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本

，加酶結(jié)合物
，加底物
。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部
，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出
，不可產(chǎn)生氣泡
。 加標(biāo)本一般用微量加樣器
，按規(guī)定的量加入板孔中
。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染
，也可用一次性的定量塑料管加樣
。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣
。也可在板孔中加入稀釋液
，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和
。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器
，使加液過程迅速完成
。

　　3.試劑的準(zhǔn)備

　　按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑

。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的
，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的
。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用
。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存
。

　　4. 保溫

　　在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后

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？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)
，有人稱之為孵育
，在ELISA中似不恰當(dāng)。 ELISA屬固相免疫測定
，抗原
、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生
。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本
，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)
，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程
，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此
。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育
。

　　溫育常采用的溫度有43℃、37℃

、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度
，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度
。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明
，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)
，產(chǎn)物的生成可達(dá)
。為加速反應(yīng)
，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行
，但不宜采用更高的溫度
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？乖贵w反應(yīng)4℃更為*
，以形成zui多的沉淀
。但因所需時(shí)間太長，在ELISA中一般不予采用
。

　　ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命

，追求企業(yè)競爭力的不斷提升
。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法
，嚴(yán)于律己，寬仁以待
，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)
，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場
，較大限度的滿足客戶的需求
。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)
。本生!您信任的合作伙伴
。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來
。


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