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ELISA實驗中常見的問題
問題一:哪些樣本可用于ELISA實驗?
答:血清
、血漿、細胞培養(yǎng)上清1
使用無熱原無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本
在收集血液樣本的過程中應避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)
，這種情況下，ELISA 實驗中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應，導致檢測結(jié)果不準確2. 血漿:是離開血管的全血經(jīng)抗凝處理后
使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本
3. 細胞培養(yǎng)上清:含有細胞分泌蛋白和死細胞的細胞培養(yǎng)液
將細胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中并以 1000×g 離心 20 分鐘
4. 細胞裂解液:經(jīng)細胞裂解液裂解后的細胞溶液
(1)吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基
(2)將細胞懸浮液收集到離心管中，以 1000×g 離心 10 分鐘
(3)加入適量的預冷 PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞
(4) 使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復凍融
(5) 4℃下以 10,000×g 離心 10 分鐘
5. 組織勻漿
(1) 用預冷的 PBS(0.01M
(2) 將組織塊稱重，然后切成盡可能小的碎塊
(3) 加入適量的預冷 PBS(體積取決于組織的重量，9 mL PBS 適用于 1 g 組織
(4) 將勻漿液吸入離心管中
一般來說
問題二:ELISA法一般都能檢測血清
答:不能。原因主要從指標適應性和體系適應性2個方面來說明
。首先
，我們要根據(jù)既往的研究和文獻報道確認，我們所檢測的靶標是否在血清、血漿中有正常表達，是否在疾病狀態(tài)，特殊生理時期，特定的生物鐘時會分泌表達
其次
問題三:為什么要做預實驗?
答:通過預實驗可以確定樣本的大致濃度范圍
，防止樣本濃度過高或者過低得不到較好的結(jié)果，同時也可以節(jié)約樣本和試劑盒。問題四:預實驗做過標曲
，正式實驗還需要做標曲嗎?答:需要
。原因是避免出現(xiàn)樣本全陰性時無陽性對照。問題五:怎么解釋樣本越稀釋濃度值越高?
答:一種原因是樣本受基質(zhì)效應的影響
。通過剃度稀釋可以消除基質(zhì)的影響，稀釋過后的樣本濃度會出現(xiàn)先升高再下降的趨勢。另一種原因是樣本受藥物的影響
。elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
