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實驗干貨—ELISA實驗過程中的常見問題解答
ELISA實驗中會遇到很多問題
Q1.標(biāo)曲不顯色或顯色很弱
，樣本顯色溶解標(biāo)準(zhǔn)品以及倍比稀釋時
Q2.標(biāo)曲和樣本均不顯色
在孵育階段靜置在桌面上，這樣非常不利于抗原抗體之間的充分接觸
Q3.標(biāo)曲顯色
當(dāng)樣本中目的蛋白濃度低或者樣本中干擾因素較強
對于目的蛋白濃度特別低的樣本
，可以嘗試用高敏ELISA，但這也并不意味著一定能檢測到樣本濃度，只能說可以提高樣本的可測率，并使結(jié)果更加可靠。因為通常用普通ELISA檢測的樣本OD值都偏低，而高敏ELISA可提高樣本OD值，使之盡量位于標(biāo)曲范圍內(nèi)，得到的數(shù)值也更加可信。Q4.標(biāo)曲和樣本都顯色
，但復(fù)孔的CV大這個問題就跟移液器和實驗者的操作有關(guān)了。移液器的使用維護不規(guī)范，就會造成移液的誤差較大;實驗者自身的操作習(xí)慣
、加樣的一致性對復(fù)孔的CV也有很大影響。掌握移液器的正確使用和維護。關(guān)于個人的操作可練習(xí)移液動作
Q5.本底偏高
標(biāo)曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(對于高敏ELISA可以適當(dāng)放寬要求)
在加入TMB顯色后，需實時觀察標(biāo)曲顯色情況
Q6.樣本經(jīng)不同梯度稀釋
有時候我們不清楚樣本中目的蛋白的濃度如何
這里涉及到了基質(zhì)效應(yīng)
。通常血清樣本加樣量較高時，血清中的各種蛋白會抑制抗原抗體的接觸，基質(zhì)效應(yīng)較明顯。而經(jīng)過稀釋后，干擾因素也隨之稀釋，影響就會較小。當(dāng)某兩個梯度稀釋后，計算得到的樣本值接近時，我們就可以認(rèn)為在該稀釋梯度時，樣本中的干擾因素影響較小，計算得到的值也是接近真實的。然而這樣的稀釋是針對目的蛋白濃度較高的樣本而言。對于濃度很低的樣本，經(jīng)過多倍稀釋后，就更加測不到了，此時可按照廠家說明書推薦的加樣方式操作。Q7.不同試劑盒中的組分能否通用
除非是公用的試劑如洗液、檢測緩沖液
，其它組分不建議用其它試劑盒的組分，甚至是同一指標(biāo)不同批次的試劑盒里的組分。這些組分(包括標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測抗體、酶等)都是經(jīng)過優(yōu)化的，如果貿(mào)然使用其它試劑盒的組分，有可能對結(jié)果產(chǎn)生影響。ELISA試劑盒本生公司產(chǎn)品種類已超過萬種
，正廣泛應(yīng)用于科研院校、中心實驗室、分子生物學(xué)等科研域。公司豐富的產(chǎn)品既能滿足研發(fā)類客戶對產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
