,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn)
,需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色
。在加底物液顯色前
,先將軟板邊緣剪凈
,這樣,此板就可*平妥坐入座架中
。
比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)
,測(cè)讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔),以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況
。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)
,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進(jìn)行計(jì)算
。
比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density
,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence
,A)
,兩者含義相同。通常的表示方法是
,將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角
,如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm,表示方法為“A492nm"或“OD492nm"
。
酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀
,通常指于測(cè)讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì)。針對(duì)固相載體形式的不同
,各有特制的適用于板
、珠和小試管的設(shè)計(jì)。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀
。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測(cè)讀速度
、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性
、度和可測(cè)范圍
、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001
,準(zhǔn)確性為±1%
,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說(shuō)
,若某孔測(cè)得的A值為1.083
,則該孔相對(duì)于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083± 0.01(1.073~1.093),重復(fù)測(cè)定數(shù)次
,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間
。酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900
,甚至更高
。超出可測(cè)上限的A值常以“*"或“over"或其它符號(hào)表示。應(yīng)注意可測(cè)范圍與線性范圍的不同
,線性范圍常小于可測(cè)范圍
,比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000
,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意
。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15-30℃
,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘
,測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。
測(cè)讀A值時(shí)
,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰
,如OPD用492nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀
,即每孔先后測(cè)讀兩次
,次在適波長(zhǎng)(W1),第二次在不敏感波長(zhǎng)(W2)
,兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的位置
。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2
,終測(cè)得的A值為兩者之差(W1-W2)
。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
各種酶標(biāo)儀性能有所不同
,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
elisa 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法
,嚴(yán)于律己
,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)
,以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)
,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏
,是我們的發(fā)展目標(biāo)
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