本生快訊：ELISA原理和具體試驗(yàn)方法以及結(jié)果處理?
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)
，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條
，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段
，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3
。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體
，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合
，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份
。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物
，經(jīng)第二次孵育后
，酶結(jié)合物就會(huì)與第一次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物
，加入TMB底物溶液
，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化
，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)
，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻
。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫
，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差
。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)
。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定
，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔
。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)
。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板
，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體
，每孔加滿洗滌液
，振蕩30秒，甩去洗滌液
，用吸水紙拍干
。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌
，洗滌次數(shù)增加一次
。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻
，37℃溫育30分鐘
。
6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液
，振蕩30秒
，甩去洗滌液，用吸水紙拍干
。重復(fù)此操作4次
。如果用洗板機(jī)洗滌
，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A
、B各50ul
，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘
。避免光照
。
8. 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液
，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果
。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
ELISA試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析：
1
、 儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2
、 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y)，相應(yīng)的S-100B標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)
，做得相應(yīng)的曲線
，樣品的S-100B含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式
，將樣品的OD值代入方程式
，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)
，即為樣品的實(shí)際濃度
。
3、 檢測值范圍： 0-200ng/ml
4
、 敏感度：1.0ng/ml
ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法
，嚴(yán)于律己
，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)
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