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實(shí)驗(yàn)原理:做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)如何操作?
ELISA實(shí)驗(yàn)原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合
,此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后
,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色氧化型,出現(xiàn)顏色反應(yīng)。
因此,可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)
,顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比ELISA實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng):
1、固相載體選擇
聚苯乙x:具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能
,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。聚氯乙x:聚氯乙x對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙x高,但空白值也略高
。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好
,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。2
、包被?div id="d48novz" class="flower left">
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④包被溫度:2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h
。?div id="d48novz" class="flower left">
3
、封閉①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體)
。?div id="4qifd00" class="flower right">
4
、加樣及孵育①加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部
,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。?div id="jfovm50" class="index-wrap">、诜跤臅r(shí)間及溫度參考試劑盒說明書
?div id="jfovm50" class="index-wrap">、蹤z測抗體
④洗板對于ELISA來說
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5
、顯色和終止①使用需檢查
,底物在加入96孔板之應(yīng)為無色透明。?div id="d48novz" class="flower left">
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ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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