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本生資訊：考馬斯藍染料原理
、使用步驟匯總考馬斯藍染料簡介：
考馬斯藍廣泛用于瓊脂糖或丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)的可視化
考馬斯亮藍R250(紅色染成藍色)電泳(更靈敏：可以檢測到0.1微克蛋白質(zhì))
考馬斯藍染料技術說明：
考馬斯藍R-250和G-250染料是考馬斯染料的兩種最常見的化學形式
考馬斯藍染色原理：
不同的顏色是染料分子不同帶電狀態(tài)的結果
當pH值小于0時
染料與蛋白質(zhì)的氨基和羧基(非共價)靜電相互作用，因此主要來自堿性氨基酸(主要是精氨酸
、賴氨酸、組氨酸)，以及疏水性氨基酸(苯丙氨酸，酪氨酸、色氨酸)。當在pH=3.0的0.01M檸檬酸鹽緩沖液中溶解時，考馬斯的最大吸收波長為555nm;蛋白質(zhì)-染料復合物的特征是峰略寬于游離染料的峰，最大值為549nm。考馬斯凝膠染色劑和布拉德福德蛋白質(zhì)分析試劑是以25-50%甲醇中的極酸性溶液配制的。在酸性條件下
，染料主要通過堿性氨基酸(主要是精氨酸、賴氨酸和組氨酸)與蛋白質(zhì)結合，而絡合物的形成穩(wěn)定了產(chǎn)生藍色的染料的負電荷陰離子形式。每個蛋白質(zhì)分子結合的考馬斯染色配體的數(shù)量約為與蛋白質(zhì)上發(fā)現(xiàn)的正電荷數(shù)成正比。蛋白質(zhì)結合導致染料從紅棕色至亮藍色(最大吸收波長為595nm)。考馬斯藍G-250染料的水溶性在膠體考馬斯染色方案中得到了很好的應用
。溶液中蛋白質(zhì)測定-布拉德福德法
1. 著色溶液成分：5%考馬斯藍G250
2. 著色溶液制備：
a.將50mg考馬斯藍G250溶于50ml甲醇中
b.從步驟1開始向溶液中加入100ml 85%H3PO4
c.將步驟2的溶液加入500ml H2O中
，混勻d.過濾以去除任何沉淀物
e.再添加350ml H2O和miw 儲存于4°C。
3. 分析流程20-150 µg 蛋白; 200-1500 µg/mL
a. 準備0.15M NaCl溶液稀釋至最終濃度為250
、b. 向單獨的試管(或分光光度計試管)中添加100µL蛋白至以上濃度NaCl稀釋液中。
c. 再向每個試管中添加5.0mL考馬斯藍
d. 將分光光度計調(diào)整到595nm的波長，并使用不含蛋白質(zhì)的試管進行空白
e. 等待5分鐘
f. 繪制標準溶液的吸光度與蛋白濃度的關系
考馬斯藍染料本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升
。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。技術支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
