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本生快訊——ELISA實驗中常遇到問題、產(chǎn)生原因及解決辦法
酶聯(lián)免疫吸附實驗
問題 1:陽性與陰性不能達到 2.1 的比值
可能的原因:陰性對照(也就是陽性對照的除目標抗原外的其它成分)中有某種成分與一抗作用。
解決的方法:純化抗原除去干擾成分
問題 2:陽性與陰性不能達到 2.1 的比值
可能的原因有 3 個:
1)一抗效價不好
解決的方法: 1)換用一抗或增加一抗用量
問題 3:增加抗原濃度
可能的問題: 一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和
解決的方法: 增加一抗用量; 或在一抗用量不變的情況下減少抗原濃度做梯度
問題 4:增加一抗?jié)舛?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">,顯色反應(yīng)沒有表現(xiàn)出應(yīng)有的梯度。
可能的原因:一抗與抗原的比例已經(jīng)飽和
。解決的方法:增加抗原用量;或在抗原用量不變的情況下減少一抗?jié)舛茸鎏荻取?/p>
問題 5:加完 TMB 顯色后顏色梯度很明顯
,但加了硫酸終止反應(yīng)后顏色梯度沒有那么明顯了。可能的原因:硫酸可能把其它成分都炭化了
。解決的辦法:加少一點硫酸
,參考值:50 μlTMB+35 μl 硫酸;或者采用 1M 的 HCL 作為終止液,50ulTMB+50ul1M HCL。這些步驟里面
,一抗和封閉是兩個關(guān)鍵。如果 ELISA 做不出滿意的結(jié)果,首先應(yīng)該從這兩個方面改進。Elisa 實驗看似簡單,其實不然ELISA 中加樣須注意如下問題:
吸取樣品時
綜上所述
ELISA實驗 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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