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本生闡述：小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1 ELISA試劑盒技術資料
適用于小鼠血清
介紹：
轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)是調(diào)節(jié)細胞生長和分化的 TGF-β超家族。這一家族除 TGF-β1 至TGF-β5 外，還有活化素、抑制素、繆勒氏管抑制物質(zhì)(MIS)和骨形成蛋白(BMPs)(1)
。TGF-β是根據(jù)這種細胞因子能使正常的成纖維細胞的表型發(fā)生轉(zhuǎn)化命名的。TGF-β1 的生物學功能主要在炎癥、組織修復和胚胎發(fā)育等方面，TGF-β對細胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調(diào)節(jié)作用。檢測原理：
ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術
。將抗小鼠 TGF-β1 單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本，標準品和樣本中的小鼠 TGF-β1 會與酶標板上的包被抗體充分結(jié)合;洗板后加入生物素化抗小鼠 TGF-β1 抗體
，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的小鼠 TGF-β1發(fā)生特異性結(jié)合;洗板后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合;洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應孔中樣品存在不同濃度的小鼠 TGF-β1，則 HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺(正相關)的藍色物質(zhì)，加入終止液后反應孔會變成黃色;最后，在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD)，樣本中的小鼠 TGF-β1 濃度與 OD 成正比，通過繪制標準曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中小鼠 TGF-β1 的濃度。注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑
。2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱
，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min
，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測
，且加入試劑的順序應保持一致。5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管
，槍頭，封板膜(※)及潔凈塑料容器。6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少
，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理(5-10 S 即可)，使管壁上的液體集中在管底部7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外
8. 為保證結(jié)果準確，每次檢測均需做標準曲線
安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液
作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸
試劑盒組成及儲存：
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ;
2 酶標試劑 6ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 ;
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ;
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶
7 終止液 6ml×1 瓶;
8 標準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶
9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶;
10 說明書 1 份
11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個
自備實驗器材(不提供
，可代購)1. 酶標儀(主波長 450nm
，參考波長 630nm)2. 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水，去離子水
，量筒等6. 稀釋用聚丙烯試管
樣本收集及儲存：
1. 細胞培養(yǎng)上清：
將細胞培養(yǎng)基移至無菌離心管
，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存)，避免反復凍融。2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后
，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存)，保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中
，根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存)，避免反復凍融。注意：血清血漿樣本避免使用溶血
、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的高值，請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù)。試劑準備：
1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒
2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積
3. 標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液(SR1)1ml至凍干標準品中，靜置15分鐘待其溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml)
4. 生物素化抗體工作液：預先計算好試驗所需用量
5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗所需用量配制
6. 標本預處理:
血清或血漿標本激活方法:
1). 在225μl標準品/標本稀釋液(1b)中
2). 加10μl 1 N HCl
3). 加10μl 1 N NaOH
4). 即用
(注意：不同的標本TGF-β1的水平可能有較大差異
細胞培養(yǎng)上清標本激活方法:
1). 在80μl標準品/標本稀釋液(1b)中，加入100μl標本
2). 加10μl 1N HCl
4). 即用，或置-20/-70℃可保存3天
7. 洗滌方法：
自動洗板：甩盡酶標板孔中液體
孔,注與吸出間隔為 30 秒，洗板 5 次
手工洗板：甩盡酶標板孔中液體
300ul/孔，靜止 30 秒后甩凈酶標板孔中液體
結(jié)果判斷：
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值
2.計算標準品、樣品的平均 OD 值：每個標準品和標本的 OD 值應減去零孔的 OD 值
3.以標準品濃度為橫坐標
4.若標本 OD 值高于標準曲線上限，應做適當稀釋后重新檢測
2. 靈敏度：
可檢測小鼠 TGF-β1 濃度達 8pg/ml，
20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差
3. 特異性：
不與小鼠 TGF-β RI/Fc Chimera 反應，人的 TGF-β1
4. 重復性：
板內(nèi)，板間變異系數(shù)<10%
5. 回收率：
在選取的健康小鼠血漿
6. 線性稀釋：
分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 TGF-β1
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1 ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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