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，應(yīng)出現(xiàn)的問(wèn)題總結(jié)ELISA操作：Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想
，應(yīng)出現(xiàn)的問(wèn)題總結(jié)優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌
。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)在做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，洗板有兩種方法：手工法洗板 和 洗板機(jī)洗板
手工洗板
手工洗板人為因素比較大，實(shí)驗(yàn)人員必須經(jīng)驗(yàn)豐富
手工操作有 浸泡式 和 流水沖洗式 兩種方法：
浸泡式
1. 吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
2. 用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去);
3. 浸泡
4. 吸干孔內(nèi)液體
。吸干應(yīng)，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;5. 重復(fù)操作步驟3和4
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法
洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%～0.2%之間
流水沖洗式
流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌
已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌
洗板機(jī)洗板
洗板機(jī)洗板人為因素少
，速度快，條件恒定，但是使用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)注意以下三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。洗滌參數(shù)
主要的參數(shù)是洗滌量
。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊(cè)中有列出洗滌量
。我們建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō)，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。洗滌次數(shù)
影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量
。當(dāng)然，洗滌次數(shù)越多控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō)
，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl。不過(guò)，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢?其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在分液的同時(shí)打開(kāi)吸液功能。換句話說(shuō)，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會(huì)溢出到其他孔中。
抽 吸
還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果
。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景(殘留量)和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體
，它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。吸液高度會(huì)明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大
，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液效率降低，殘留量增加。目前的洗板機(jī)一般使用兩種類(lèi)型的洗頭：剛性和浮動(dòng)
。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過(guò)程中自由上下移動(dòng)，而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｊ褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來(lái)更為復(fù)雜，因?yàn)槟阈枰浅Ｗ屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板，那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí)抽吸的位置也對(duì)殘留量有著重要影響;如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)(這很常見(jiàn)，因?yàn)楦?
反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量
。C形底(平底圓角)的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。洗板時(shí)注意事項(xiàng)：
1. 需每天校正注液量及殘液量
，洗滌后殘液量不得大于2 μl。2. 及時(shí)更換破損吸液針，避免破壞底板包被
。3. 針對(duì)不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度
，避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板。4. 注意調(diào)整洗液量
，洗液量過(guò)多將溢出，過(guò)少將達(dá)不到洗滌效果。5. 關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道
，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道。6. 不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。
為了洗滌效果較好
，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1～2次，能達(dá)到理想的洗滌效果。ELISA看起來(lái)很簡(jiǎn)單，但是在實(shí)際操作過(guò)程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，高品質(zhì)的試劑盒與專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)也是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的保證!ELISA 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升
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