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ELISA實驗：ELISA溫育時間
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應
，即加樣本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)溫育時間：
溫育這一步是ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟
ELISA屬固相免疫測定
在一定溫度范圍內(nèi)
溫育選擇：
溫育常采用的溫度有43℃
在建立ELISA方法作反應動力學研究時
溫育方式常采用溫箱法
、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結(jié)果的吸光度差異(“邊緣效應"即外周孔顯色較中心孔深)?div id="4qifd00" class="flower right">若用溫箱
，ELISA板應放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料(如金屬等)，在盒底墊濕的紗布，最后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此。為避免酶標板底部受水汽或磨損導致的讀數(shù)誤差無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放
，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時
，ELISA板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證時間精確，一個人一次不宜多于兩塊板同時操作、測定。關(guān)于溫育，實際測定操作中應注意哪些?
● 不同的溫育環(huán)境對檢測結(jié)果有影響
，操作中應嚴格按照說明書控制溫育時間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應。● 為確保各板溫度都能迅速達到平衡
，不可將反應板疊加放置，設(shè)定的溫度及時間嚴格按照說明書進行，一般加入待測樣本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因為很多恒溫箱的構(gòu)造，溫度及檢測的溫度并非酶標板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時建議將溫度計置于酶標板旁，保證酶標板旁溫度為37℃。● 干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫
，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。● 試劑盒一般設(shè)定的反應溫度為 37℃
，在這個溫度下放置 30 分鐘，蒸騰的水分會許多，對于全部反應體系來講，各種反應物的濃度會不斷增加，這么必會致使反應最終的OD值增加，溫育時貼封片或加蓋，避免標本或稀釋液蒸發(fā)。● 試劑盒設(shè)定的一定溫度下的反應時間并不是反應的終點，提高反應的溫度
實驗操作的嚴謹性與實驗操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應儲存于2-8℃
ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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