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elisa試劑盒操作方法
、ELISA測(cè)定出現(xiàn)問(wèn)題及解決雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml
，37℃ 10～30分鐘。5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
。6. 結(jié)果判定：可于白色背景上
，直接用肉眼觀(guān)察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml
，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜;2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
4.(同時(shí)做空白
、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌;
6.’最后一遍用DDW洗滌
。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4
、5、6。ELISA測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及可能的原因：
可能的原因(非試劑盒本身的原因)
1.弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本檢測(cè)不出 溫育的時(shí)間或溫度不夠;顯色反應(yīng)時(shí)間太短;所用配制緩沖液的蒸餾水有問(wèn)題
2.測(cè)定的重復(fù)性差 (相同樣本兩次測(cè)定結(jié)果不一致) 這是典型的由測(cè)定操作引起的問(wèn)題
，包括(1)加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致;
(2)加樣過(guò)快，孔間發(fā)生污染;
(3)加錯(cuò)樣本;
(4)加樣本及試劑時(shí)
，加在孔壁上部非包被區(qū);(5)不同批號(hào)試劑盒中組分混用;
(6)溫育時(shí)間
、洗板、顯色時(shí)間不一致;(7)孔內(nèi)污染雜物;
(8)酶標(biāo)儀濾光片不正確;
(9)血清標(biāo)本未凝固即加入
3.白板 (陽(yáng)性對(duì)照不顯色)
(1)漏加酶結(jié)合物;
(2)洗板液配制中出現(xiàn)問(wèn)題
(3)漏加顯色劑A或B;
(4)終止劑當(dāng)顯色劑使用
。4.全部板孔均有顯色
(1)洗板不干凈;
(2)顯色液變質(zhì);
(3)加底物的吸光受酶污染;
(4)洗板液受酶等污染
Elisa試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
