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什么是ELISA,ELISA目的及實驗方法有哪些?
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定,指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法
。ELISA應用的范圍很廣
,而且正在不斷地擴大,原則上ELISA可用于檢測一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。擴展資料 :
ELISA操作步驟復雜
,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標準曲線的范圍一般較寬
,曲線最高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)值,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。ELISA也可應用于病毒抗體檢測:流感病毒
、腮腺炎病毒、麻診、風疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等,其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外,還可用于鑒定病毒型別,例如皰疹病毒。ELISA目的是檢測血清中特定的抗原
,以達到定性判斷的目的。酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上
,利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。ELISA分類方法:
1
、夾心法夾心法常用于檢測大分子抗原
2、間接法
間接法常用于檢測抗體
3
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原
ELISA實驗所有方法的缺點很明顯:
1
2、收自身抗體
3、不論儀器和手工操作
1
將抗原直接固定在固相載體上
優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運用二抗可防止交互反響
缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號
2.間接法(indirectELISA)
此測定辦法與直接法相似
,不一樣在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。優(yōu)勢:二抗能夠加強信號,并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析
。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。缺陷:交互反響發(fā)作的機率較高。
3.雙抗體夾心法(sandwichELISA)
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間
,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量優(yōu)勢:高活絡
缺陷:抗原必定得具有兩個以上的抗體聯(lián)系部位
4.競爭法(competitiveELISA)
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當樣品里的自在抗原越多
優(yōu)勢:可適用比擬不純的樣本
缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。
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