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貼壁細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題分析及解決方法!
貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)要貼附于培養(yǎng)(瓶)器皿壁上
一、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)
，細(xì)胞不貼壁常見(jiàn)原因：胰蛋白酶消化過(guò)度;支原體污染;培養(yǎng)基pH值過(guò)堿(NaHCO3分解);細(xì)胞老化;接種細(xì)胞起始濃度太低或太高
。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體
。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物;使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2;啟用新的保種細(xì)胞;調(diào)節(jié)接種細(xì)胞濃度。二
、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢常見(jiàn)原因：由于更換不同培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必須成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);接種細(xì)胞起始濃度太低;細(xì)胞已老化;支原體污染
。
解決方法：比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)
三
常見(jiàn)原因及解決方法：
1
2
四
常見(jiàn)原因及解決方法：
1
、傳代細(xì)胞密度太大：一般細(xì)胞匯合度達(dá)到80%時(shí)可進(jìn)行傳代操作，傳代密度需適中，傳代密度過(guò)高也會(huì)導(dǎo)致傳代后漂浮;2
、細(xì)胞狀態(tài)不好：可通過(guò)提高血清比例、穩(wěn)定培養(yǎng)環(huán)境等方法進(jìn)行改善;3
、吹打次數(shù)過(guò)多造成機(jī)械損傷：輕柔吹打，細(xì)胞呈單顆粒時(shí)可停止吹打，吹打過(guò)程避免氣泡產(chǎn)生;4
、培養(yǎng)基更換后不適應(yīng)：更換回原來(lái)的培養(yǎng)基;或者與原培養(yǎng)基比例混合后使用，使細(xì)胞有個(gè)適應(yīng)期。五、傳代后細(xì)胞全部飄起
解決方法：檢查所使用的培養(yǎng)基的顏色是否偏紫色
，檢查瓶蓋是否透氣，不透氣瓶蓋是否被擰松。通常培養(yǎng)基偏堿
，顏色就會(huì)偏紫，主要是因?yàn)榕囵B(yǎng)基里的酚紅指示劑遇酸變黃、遇堿變紫，培養(yǎng)基量太少，或培養(yǎng)基存放時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)都會(huì)變堿。建議配好培養(yǎng)基后分裝到50mL離心管并于一周內(nèi)用完，量少時(shí)放到15mL離心管里保存。六、傳代后細(xì)胞成團(tuán)
解決方法：
1
、低密度接種，延長(zhǎng)換液時(shí)間，防止細(xì)胞脫落;2
、使用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)器皿，以增加細(xì)胞貼壁牢固度，降低細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率;3
、重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，加大血清比例(增加比例不超過(guò)5%);4
七、傳代后細(xì)胞變形
原因及解決方法如下
1)變形
，但細(xì)胞還在生長(zhǎng)：可能是血清批次不一樣導(dǎo)致，血清成分復(fù)雜，不同批次和品牌間均存在成分差異，影響細(xì)胞狀態(tài)。建議使用同一批次血清，更換血清時(shí)需與原血清比例混合后使用，使細(xì)胞有過(guò)渡期;2)變形
，但細(xì)胞不長(zhǎng)，且碎片增多：可能傳代操作過(guò)程損傷，常見(jiàn)于消化不當(dāng)，或者潛在支原體等污染導(dǎo)致細(xì)胞病態(tài);消化時(shí)間根據(jù)每個(gè)細(xì)胞的狀態(tài)來(lái)調(diào)整，消化過(guò)度或者消化不充分均會(huì)對(duì)細(xì)胞造成影響;培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，實(shí)驗(yàn)環(huán)境盡量潔凈，確保細(xì)胞無(wú)外源污染。注：僅供參考，如有如有侵權(quán)或不愿小編轉(zhuǎn)載發(fā)布請(qǐng)聯(lián)系刪除
，謝謝!本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
