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BUNSEN本生帶你分析影響ELISA中非特異性顯色的原因
影響ELISA中非特異性顯色的原因很多
試劑盒特異性因素
1. 固相載體的選擇
2.包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中
，試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目由于技術(shù)條件的限制，包被用抗原或抗體的純度不可能達到100%，所以有些非特異性顯色不可避免，只能盡可能提高純度，提高特異性。目使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。3.包被抗體的效價。具有高親和力和高特異性的包被抗體
，是決定試劑特異性的重要方面。4 .封閉。是ELISA中重要的一步
，目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙[2]，減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。
檢驗標(biāo)本中含有酶標(biāo)記物的干擾物
1.內(nèi)源性干擾物：類風(fēng)濕因子(RF)
、黃疸等，類風(fēng)濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體，多數(shù)為IgM類黃疸血標(biāo)本中常含有內(nèi)源性過氧化物酶
2 .外源性干擾物
標(biāo)本凝集不全時，血清中會殘留部分纖維蛋白原
，也易造成假陽性。操作過程中的問題造成假陽性
1.加樣
對于間接ELISA標(biāo)本一般都要進行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會造成誤差
，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時，很小的絕對誤差，會導(dǎo)致較大的相對誤差，使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本，可較好地避免以上誤差。2.洗滌
在ELISA中正確的洗滌是得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步
，應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān)3 .溫育
每種試劑都有其反應(yīng)模式
4.酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測定結(jié)果的儀器
，酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否，決定結(jié)果的可靠度。先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進行保養(yǎng)，對濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確，使用雙波長，一個檢測波長，一個參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細閱讀說明書標(biāo)簽：BUNSEN本生 ELISA試劑盒 試劑盒 試劑 本生 抗原 抗體 微量滴定板
ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升
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