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使用PCR板時(shí)防止錯(cuò)誤的幾個(gè)技巧
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中廣為人知的方法之一
PCR 板在熱封方面非常有效
對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒
由于存在雜質(zhì)
雜質(zhì)和污染物以各種形式出現(xiàn)
有許多方法可以大大降低 PCR 板的污染率
使用已滅菌的濾芯吸頭是另一種防止雜質(zhì)通過移液器進(jìn)入樣品的有用方法。
提供一套干凈的設(shè)備
在移液器、架子和長(zhǎng)凳上使用漂白劑
為所有 PCR 反應(yīng)分配預(yù)留空間，以進(jìn)一步減少顆粒污染
在每一步都使用干凈的手套并經(jīng)常更換。
PCR 板
檢查模板的濃度和純度
應(yīng)保持使用 PCR 分析樣品時(shí)使用的工作臺(tái)和設(shè)備的清潔度。在分析和處理之前驗(yàn)證樣品的純度至關(guān)重要
通常
爭(zhēng)取260nm/280nm的吸光度比不得小于1.8
。而隨后使用 230nm 和 320nm 之間的波長(zhǎng)來識(shí)別雜質(zhì)。在一個(gè)例子中，離液鹽和其他有機(jī)化合物在 230nm 的吸收率下被檢測(cè)到
。同時(shí)在 320nm 的吸光度下檢測(cè)和驗(yàn)證 DNA 樣品中的濁度。避免 PCR 板與產(chǎn)品過載：
盡管希望同時(shí)運(yùn)行多個(gè)產(chǎn)品，但它會(huì)導(dǎo)致 PCR 板的交叉污染
。用不同的產(chǎn)品使 PCR 板超載會(huì)浪費(fèi)
，并且很難確定樣品。保留等分 PCR 試劑的記錄：
連續(xù)冷凍/解凍循環(huán)和頻繁使用等分可能會(huì)通過重結(jié)晶損壞 PCR 試劑
、酶和 DNTP。在準(zhǔn)備要分析的樣品時(shí)
，始終努力監(jiān)控使用的等分試樣的速率。優(yōu)選的 LIMS 更適合控制試劑和樣品冷凍或解凍的庫(kù)存和數(shù)量。
選擇最佳退火溫度：
選擇和使用錯(cuò)誤的退火溫度是另一種方法 PCR 結(jié)果包含錯(cuò)誤
。有時(shí)，反應(yīng)并沒有按計(jì)劃進(jìn)行
。需要降低退火溫度以促進(jìn)成功的反應(yīng)然而，降低溫度會(huì)增加假陽(yáng)性和引物二聚體出現(xiàn)的機(jī)會(huì)
在使用 PCR 板時(shí)
引物設(shè)計(jì)軟件輔助設(shè)計(jì)
PCR板 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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