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【BUNSEN本生】ELISA實(shí)驗(yàn)-如何降低ELISA背景
更新時(shí)間：2023-12-01瀏覽：1367次

　　ELISA實(shí)驗(yàn)-如何降低ELISA背景


　　ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗

、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉
。如何降低ELISA的背景，下面便是BUNSEN本生技術(shù)的詳解：

　　1 洗滌很重要

　　洗滌步驟看似很無(wú)聊

，其實(shí)很重要
，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音
。如有必要
，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)
。如果背景過(guò)高
，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)
。

　　2 封閉更關(guān)鍵

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)

。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧
。如果您的背景過(guò)高
，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液
，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。

　　


　　如果您一直被背景問(wèn)題所困擾

，那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液
。這可能需要時(shí)間，但也是值得的
。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑
。您使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑
、吸附的抗原
、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合
，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原
、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用
。

　　常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜

、穩(wěn)定
，在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用
，因?yàn)楹苋菀妆幌吹?div id="4qifd00" class="flower right">
。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)
，它會(huì)降低特異結(jié)合
，產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液
，后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉
。

　　蛋白封閉液則有所不同，

。它們與開放位點(diǎn)結(jié)合并封閉
，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)
、脫脂奶粉
、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用
。不過(guò)
，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問(wèn)題的一種方法是使用雞或魚的正常血清
。

　　3 抗體濃度須優(yōu)化

　　記住

，非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)
，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗
。

　　4 檢測(cè)試劑要適量

　　切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高

，或者未正確稀釋
，則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度
，如有必要
，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。

　　ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命

，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升
。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己
，寬仁以待
，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)
，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求
。與客戶的共贏
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。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作
，共創(chuàng)美好的未來(lái)。

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