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ELISA實驗結(jié)果不理想
優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌
在做ELISA實驗時
手工洗板：
手工洗板人為因素比較大
手工操作有 浸泡式 和 流水沖洗式 兩種方法：
浸泡式
1. 吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
2. 用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后
，即甩去);3. 浸泡，即將洗滌液注滿板孔
，放置1～2分鐘，間歇搖動4. 吸干孔內(nèi)液體
5. 重復(fù)操作步驟3和4
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法
洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20
，其濃度可在0.05%～0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
流水沖洗式
流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌
，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌
。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。洗板機洗板：
洗板機洗板人為因素少，速度快
，條件恒定，但是使用洗板機洗板時應(yīng)注意以下三個關(guān)鍵點。洗滌參數(shù)
主要的參數(shù)是洗滌量
。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景ELISA試劑盒的使用手冊中有列出洗滌量。我們建議使用350µl洗滌液進行洗滌
，以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。洗滌次數(shù)
影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當然
，洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過，一般而言，包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說
，96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過，有些自動化洗板機可設(shè)置程序，分配遠遠超出這個量的洗滌液，比如1 ml抽 吸
還有一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體
吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大
目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭：剛性和浮動
。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動，而剛性洗頭則固定在適當?shù)奈恢谩Ｊ褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜，因為你需要非常仔細地調(diào)整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板，那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時，吸頭會降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔只使用一個抽吸點(這很常見
反應(yīng)孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低
洗板時注意事項：
1. 需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于2 μl
2. 及時更換破損吸液針
3. 針對不同廠家酶標板注意調(diào)整吸液頭下降高度
4. 注意調(diào)整洗液量
5. 關(guān)機前使用蒸餾水沖洗管道
4. 不同種試劑盒的洗液嚴禁混合使用
為了洗滌效果較好
ELISA 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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