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“elisa試劑盒"常見的問題及解答
問：抗原檢測出的分子量比資料上的大
，是怎么回事?答：a)抗原形成了二聚體
問：蛋白轉(zhuǎn)移不到膜上
，但膠上有，同時Marker 轉(zhuǎn)上去了，為什么?答：可能是：a)樣品濃度過低;b)轉(zhuǎn)移時間不夠
。問：磷酸化抗體的檢測樣本制備時是否一定要加NaF等?
答：NaF是一種廣譜磷酸化酶的抑制劑，一般加
。但是不加也可以，大部分時候是不用加的。問：要驗(yàn)證某個細(xì)胞上有無該蛋白的存在
，需要做免疫組化和western blot試驗(yàn)嗎?做這兩個試驗(yàn)時的一抗和二抗可以共用嗎?答：①免疫組化可以用來進(jìn)行定位
，但是不能定量，而且有時會有假陽性，不易與背景區(qū)分;Western blot可以特異性檢測某個蛋白質(zhì)分子，進(jìn)行定量，但是不能定位?div id="d48novz" class="flower left">
問：做Western Blot時
，提取蛋白后凍存(未加蛋白酶抑制劑)，用的博士德的一抗，開始還有點(diǎn)痕跡，現(xiàn)在越來越差，上樣量已加到120μg，換了個santa cloz的一抗仍不行。是什么原因?蛋白酶抑制劑單加PMSF行嗎?答：懷疑是樣品問題
，可能是：1，樣品不能反復(fù)凍融;2，樣品未加蛋白酶抑制劑。同時，建議檢查Western Blot過程，提高一抗?jié)舛?div id="d48novz" class="flower left">問：細(xì)胞水平要做western blot
，多少細(xì)胞提的蛋白夠做western blot?答：一般5×10^6就足夠了
問：同一樣品能同時提RNA又提蛋白么?這樣對western blot有無影響?
答：能，沒有問題
。問：同一蛋白樣品能同時進(jìn)行兩種因子的Western Blot檢測嗎?
答：當(dāng)然可以
，有的甚至可以同時測幾十種樣品。問：如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白
，操作需要注意什么?答：如果是膜蛋白和胞漿蛋白
，所用的去垢劑要溫和得多，這時加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。問：我的樣品的蛋白含量很低
，每微升不到1微克，但是在轉(zhuǎn)膜時經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)只有一部分蛋白轉(zhuǎn)到了膜上，就是在轉(zhuǎn)膜后染膠發(fā)現(xiàn)有的孔所有的蛋白條帶都在答：你可以加大上樣量
ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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