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問題解析：熒光定量PCR反應(yīng)結(jié)束無擴(kuò)增曲線
熒光定量 PCR反應(yīng)結(jié)束無擴(kuò)增曲線出現(xiàn)這個(gè)問題的常見原因
，主要可以歸結(jié)為以下幾種：反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠：一般建議設(shè)置循環(huán)數(shù)為 40
。程序中未設(shè)置信號采集步驟：注意，兩步法擴(kuò)增程序一般將信號采集設(shè)置在退火延伸階段;三步法擴(kuò)增程序應(yīng)當(dāng)將信號采集設(shè)置在 72 度延伸階段
。引物降解：長時(shí)間未使用的引物應(yīng)先通過 PAGE 電泳檢測完整性
，以排除引物降解的可能性。模板濃度太低：這個(gè)大家減少稀釋度重復(fù)實(shí)驗(yàn)就可以了
，一般來說，未知濃度的樣品先從最高濃度做起。模板降解：無解
，請重新制備模板，可以重復(fù)實(shí)驗(yàn)溶解曲線形狀異常
(1)雜峰在主峰之前，Tm 約為 70 - 75℃——一般為引物二聚體
這種情況主要有三個(gè)解決方法：
重新設(shè)計(jì)引物;
雜峰為引物二聚體
另外
(2)雜峰在主峰之后
上圖這種情況就是非特異性擴(kuò)增
大家可以先增加退火溫度再試試看
為了避免這種麻煩，BUNSEN本生小編建議大家在進(jìn)行熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)之前
(3)只有引物二聚體
如果擴(kuò)增片段過短(小于 80bp)，那么僅通過融解曲線就很難區(qū)分引物二聚/目的條帶
另外
總之
注：以上資料僅供參考!
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