,但應(yīng)避免反復凍融
。
2. 血漿:
用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本
,并將標本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘
,取上清即可檢測
,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存
,但應(yīng)避免反復凍融
。
3. 組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液
,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:首先將組織塊移入
玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進行充分研磨,該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復凍融法可重復2 次)
。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘
,留取上清即可檢測。
4. 細胞裂解液:
1)貼壁細胞需要先用胰酶消化
,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);
2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次;
3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞
,再反復凍融):
i 超聲破碎:取適量PBS 重懸細胞
,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂
。
ii 反復凍融:將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍
,室溫融解,反復3 次
,使細胞溶脹破碎
。
4)將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘,收集上清備用
。
5. 細胞培養(yǎng)上清或其它生物標本:
請 1000×g 離心 20 分鐘
,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存
,但應(yīng)避免反復凍融
。
注意:
1. 以上標本均需密封保存,4oC保存應(yīng)小于1周
,-20oC不應(yīng)超過1個月
,-80oC不應(yīng)超過2個月。
2. 標本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫
,不應(yīng)加熱使之融解
。
3. 實驗前紅細胞
裂解液必須用標準品稀釋液稀釋。
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