微生物異化型硝酸鹽還原酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
更新時(shí)間:2025-02-25瀏覽:584次
微生物異化型硝酸鹽還原酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
微生物異化型硝酸鹽還原酶(NaR)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟如下:
?1. 試劑準(zhǔn)備與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備?
根據(jù)說明書
,將所有試劑從冰箱取出
,待其回溫至室溫
。若試劑為凍干型
,需加入適量緩沖液進(jìn)行復(fù)溶?。
準(zhǔn)備所需工作液
,包括稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
、測(cè)試樣品、檢測(cè)抗體和底物等?
。
按照說明書
,制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?
。
?2. 樣品加入與孵化?
在酶標(biāo)板的相應(yīng)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品和經(jīng)過適當(dāng)處理的測(cè)試樣品(如細(xì)胞上清、血清等)
,確保無氣泡
,且每孔體積一致?。
蓋上酶標(biāo)板
,按說明書要求進(jìn)行適當(dāng)時(shí)間的孵化?
。
?3. 洗滌?
使用ELISA洗滌液反復(fù)洗滌板孔,以去除未結(jié)合的物質(zhì)
。洗滌的次數(shù)和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行?
。
?4. 添加檢測(cè)抗體與再次孵化?
將標(biāo)記有酶的檢測(cè)抗體加入到每個(gè)孔中,蓋上酶標(biāo)板
,再次按說明書要求進(jìn)行適當(dāng)時(shí)間的孵化?
。
?5. 再次洗滌?
與前面的洗滌步驟相似,再次洗滌以去除未特異性結(jié)合的標(biāo)記抗體?
。
?6. 添加底物與顏色發(fā)展?
在每個(gè)孔中加入適當(dāng)?shù)牡孜?如TMB)
,根據(jù)試劑盒的說明
,孵化適當(dāng)?shù)臅r(shí)間以使顏色發(fā)展。在此過程中
,避免暴露于強(qiáng)光?
。
?7. 終止反應(yīng)與讀取結(jié)果?
在的時(shí)間后,加入終止液以停止酶的反應(yīng)
,此時(shí)顏色會(huì)發(fā)生變化(如藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色)?
。
使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)上測(cè)量每個(gè)孔的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中微生物異化型硝酸鹽還原酶的濃度?
。
請(qǐng)注意
,以上步驟為通用流程,具體細(xì)節(jié)(如稀釋倍數(shù)
、溫育時(shí)間等)可能因不同品牌或批次的試劑盒而有所差異
。因此,在實(shí)際操作前
,務(wù)必詳細(xì)閱讀并遵循該試劑盒附帶的具體使用說明書
。
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