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標(biāo)簽：Elisa 抗體 標(biāo)準(zhǔn)品 緩沖液 本生試劑盒 裂解液 蛋白酶
在ELISA檢測中
一
1. 樣本收集與保存
快速處理：避免樣本降解(如組織樣本離體后盡快冷凍或液氮保存)。
儲存條件：-80℃長期保存
2. 樣本均質(zhì)化
通過物理或化學(xué)方法破碎細(xì)胞/組織，釋放目標(biāo)分子：
機(jī)械破碎：
液氮研磨(適用于組織
勻漿器/超聲破碎(適用于軟組織
珠磨法(適用于堅(jiān)硬樣本如種子、糞便)
酶解法：
使用蛋白酶K
3. 裂解緩沖液選擇
根據(jù)目標(biāo)分子性質(zhì)選擇裂解液：
RIPA緩沖液(通用型
PBS/TBS緩沖液(溫和裂解，適用于可溶性蛋白)
特殊緩沖液：
含EDTA(抑制金屬蛋白酶)
含蛋白酶抑制劑(防止蛋白降解)
4. 離心去雜質(zhì)
低溫離心(4℃
取上清用于ELISA檢測(避免吸取沉淀)
5. 蛋白濃度測定與標(biāo)準(zhǔn)化
用BCA/Bradford法測定總蛋白濃度，調(diào)整至統(tǒng)一濃度(如1–2 mg/mL)
6. 干擾物去除(可選)
脂質(zhì)干擾：有機(jī)溶劑(如丙酮)沉淀或脂質(zhì)吸附劑處理。
多糖/酚類干擾(植物樣本)：PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)吸附
內(nèi)源性酶干擾：加熱滅活或添加抑制劑(如HRP樣本避免辣根過氧化物酶干擾)
二、常見固體樣本處理示例
1. 動物組織(如肝臟
步驟：
液氮速凍
加入RIPA裂解液(含蛋白酶抑制劑)
，冰上裂解30分鐘。離心取上清，測定蛋白濃度后稀釋至相同濃度
。2. 植物葉片
步驟：
液氮研磨后
，加入PVP(去除多酚)和Tris-HCl緩沖液(pH 8.0)。離心后取上清，必要時透析去除色素
。3. 糞便樣本
步驟：
懸浮于PBS(如1:10 w/v)
離心去除大顆粒
4. 食品(如肉類、谷物)
步驟：
均質(zhì)化后
離心后取上清，必要時脫脂(正己烷洗滌)
三
避免過度裂解：可能導(dǎo)致目標(biāo)蛋白降解或非特異性結(jié)合。
對照設(shè)置：
陰性對照：裂解緩沖液空白
陽性對照：已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品
樣本稀釋：若信號過強(qiáng)，需用裂解緩沖液稀釋后重測
批次一致性：同一實(shí)驗(yàn)使用相同處理?xiàng)l件的樣本
四、優(yōu)化方向
預(yù)實(shí)驗(yàn)：測試不同裂解液和離心條件
試劑盒兼容性：某些ELISA試劑盒提供專用樣本處理緩沖液(如糞便DNA/RNA保存液)。
通過規(guī)范化的固體樣本處理
注：以上資料僅供參考
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