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ELISA實驗常見問題分析與解決方案
一
、顯色異常問題白板(無顯色)?
原因?：試劑失活(如HRP污染或底物失效)
、漏加關(guān)鍵組分(酶標(biāo)抗體/顯色劑)、孵育溫度或時間不足?。解決?：更換新鮮試劑
高背景/非特異性顯色?
原因?：封閉不充分(如BSA濃度不足)
解決?：優(yōu)化封閉條件(延長至1-2小時)
二、重復(fù)性差
加樣誤差?：復(fù)孔間加樣量或時間不一致
洗板不均?：洗板機(jī)管道阻塞或手工洗板力度不一致?。
解決方案?：使用同一移液器
三、假陽性/假陰性
假陽性?
溶血/細(xì)菌污染?：紅細(xì)胞釋放過氧化物酶或細(xì)菌內(nèi)源性HRP干擾?
類風(fēng)濕因子(RF)?：與IgG Fc段非特異性結(jié)合?
處理?：離心去除溶血樣本，添加RF阻斷劑?
假陰性?
抗原降解?：反復(fù)凍融或保存時間過長?
競爭法操作錯誤?：如先加酶標(biāo)抗體后加樣本?。
處理?：分裝凍存樣本
四、標(biāo)準(zhǔn)曲線異常
標(biāo)曲擬合差(R2<0.99)?：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯誤或酶標(biāo)儀波長設(shè)置不當(dāng)?
批間差異?：不同批次試劑活性波動
五
加樣?：槍頭懸空加至孔底
孵育?：覆蓋封板膜防止蒸發(fā)
洗滌?：使用含0.05% Tween-20的洗滌液，拍干?
六
邊緣效應(yīng)?：周邊孔顯色偏強(qiáng)，建議質(zhì)控孔置于板中央?。
酶標(biāo)板選擇?：聚苯乙烯板需評估吸附性能
(注：具體問題需結(jié)合試劑盒說明書及實驗條件調(diào)整?。)
注：以上資料僅供參考
，不作為實驗數(shù)據(jù)，具體請咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師;天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升
。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
