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BUNSEN本生：ELISA實(shí)驗(yàn)過程中的常見問題解答
更新時(shí)間：2025-07-29瀏覽：205次

　　

　　ELISA實(shí)驗(yàn)中會(huì)遇到很多問題

，不是這有點(diǎn)小問題
，就是那有點(diǎn)小問題，那該怎么辦呢?以下便是BUNSEN本生技術(shù)小編的總結(jié)：

　　1.標(biāo)曲不顯色或顯色很弱

，樣本顯色

　　溶解標(biāo)準(zhǔn)品以及倍比稀釋時(shí)，未渦旋震蕩或不夠充分

。標(biāo)準(zhǔn)品溶解
、倍比稀釋時(shí)均需要渦旋震蕩以保證充分混勻。單純依靠移液器反復(fù)吹打
，效率較低
、效果也不一定最佳。

　　2.標(biāo)曲和樣本均不顯色

　　在孵育階段靜置在桌面上

，這樣非常不利于抗原抗體之間的充分接觸
，導(dǎo)致顯色偏弱，推薦孵育階段
，使用ELISA專用的微孔板振蕩器
，調(diào)至合適的頻率，使抗原抗體充分接觸
，保證結(jié)合效果
。如果排除上述原因，有可能是漏加了某個(gè)組分
，如檢測(cè)抗體
、酶等。對(duì)于比較馬虎的新手
，一定要做好標(biāo)記和記錄
，或者使用添加染料的ELISA試劑盒。

　　3.標(biāo)曲顯色

，樣本不顯色

　　當(dāng)樣本中目的蛋白濃度極低或者樣本中干擾因素較強(qiáng)

，就無法檢測(cè)到。目前ELISA仍然是蛋白檢測(cè)靈敏度的方法
，與不同技術(shù)結(jié)合后
，衍生出了多種類型的ELISA，提高了檢測(cè)靈敏度
。




　　對(duì)于目的蛋白濃度特別低的樣本

，可以嘗試用高敏ELISA，但這也并不意味著一定能檢測(cè)到樣本濃度
，只能說可以提高樣本的可測(cè)率
，并使結(jié)果更加可靠。因?yàn)橥ǔＳ闷胀‥LISA檢測(cè)的樣本OD值都偏低
，而高敏ELISA可提高樣本OD值
，使之盡量位于標(biāo)曲范圍內(nèi)，得到的數(shù)值也更加可信
。

　　4.標(biāo)曲和樣本都顯色

，但復(fù)孔的CV大

　　這個(gè)問題就跟移液器和實(shí)驗(yàn)者的操作有關(guān)了

。移液器的使用維護(hù)不規(guī)范，就會(huì)造成移液的誤差較大;實(shí)驗(yàn)者自身的操作習(xí)慣
、加樣的一致性對(duì)復(fù)孔的CV也有很大影響
。

　　掌握移液器的正確使用和維護(hù)。關(guān)于個(gè)人的操作可練習(xí)移液動(dòng)作

、加快速度
，確保移液的精密度。

　　5.本底偏高

，樣本值測(cè)不到

　　標(biāo)曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(對(duì)于高敏ELISA可以適當(dāng)放寬要求)

。尤其是樣本值特別低的時(shí)候，本底過高會(huì)掩蓋目的信號(hào)
，導(dǎo)致無法測(cè)到樣本值
。

　　在加入TMB顯色后，需實(shí)時(shí)觀察標(biāo)曲顯色情況

。通常在S5孔有肉眼可見的微弱藍(lán)色
，即可終止反應(yīng)。

　　6.樣本經(jīng)不同梯度稀釋

，計(jì)算得到的樣本值差異較大

　　有時(shí)候我們不清楚樣本中目的蛋白的濃度如何

，應(yīng)該如何稀釋，那么我們就會(huì)做下預(yù)實(shí)驗(yàn)
，確定稀釋倍數(shù)
。然而有時(shí)候同一樣本做了幾個(gè)不同梯度稀釋后，計(jì)算得到的樣本值之間差異較大
，應(yīng)該選擇哪一個(gè)稀釋倍數(shù)呢?

　　這里涉及到了基質(zhì)效應(yīng)

。通常血清樣本加樣量較高時(shí)，血清中的各種蛋白會(huì)抑制抗原抗體的接觸
，基質(zhì)效應(yīng)較明顯
。而經(jīng)過稀釋后，干擾因素也隨之稀釋
，影響就會(huì)較小
。當(dāng)某兩個(gè)梯度稀釋后
，計(jì)算得到的樣本值接近時(shí)
，我們就可以認(rèn)為在該稀釋梯度時(shí)，樣本中的干擾因素影響較小
，計(jì)算得到的值也是接近真實(shí)的
。然而這樣的稀釋是針對(duì)目的蛋白濃度較高的樣本而言。對(duì)于濃度很低的樣本
，經(jīng)過多倍稀釋后
，就更加測(cè)不到了
，此時(shí)可按照廠家說明書推薦的加樣方式操作。

　　7.不同試劑盒中的組分能否通用

　　除非是公用的試劑如洗液

、檢測(cè)緩沖液
，其它組分不建議用其它試劑盒的組分，甚至是同一指標(biāo)不同批次的試劑盒里的組分
。這些組分(包括標(biāo)準(zhǔn)品
、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測(cè)抗體
、酶等)都是經(jīng)過優(yōu)化的
，如果貿(mào)然使用其它試劑盒的組分，有可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響
。

　　注：以上資料僅供參考

，具體產(chǎn)品信息請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

　　ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命

，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升
。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己
，寬仁以待
，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)
，較大限度的滿足客戶的需求
。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)
。本生!您信任的合作伙伴
。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來
。

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