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凍存試劑
凍存試劑或樣品的解凍,如果時間比較充裕
為了使生物樣品在一定的時間內(nèi)保持穩(wěn)定
1. 長期保存的組織樣品要盡快凍存
樣品貯存的溫度對有效保存時間的影響很大。選擇合適的貯存方式和貯存溫度很重要
2. 樣品凍存的優(yōu)缺點
相比于FFPE樣品
3. 凍存溫度的選擇
前已述及
,根據(jù)一般的物理化學(xué)規(guī)律,溫度越低,樣品的穩(wěn)定時間越長。在超低溫冰箱面世之前,-20℃ 冰箱是常用的低溫貯存工具之一。實踐證明,-20℃ 時組織內(nèi)的大分子仍然可以被降解。而且,0至-60℃ 是水的結(jié)晶溫度。結(jié)晶容易對細胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)造成傷害,一般不在這一溫度范圍來保存組織和細胞。一些經(jīng)過提純的大分子可以在這一溫度范圍內(nèi)短期保存。目前,大多數(shù)生物和醫(yī)學(xué)研究機構(gòu)用-80℃ 冰箱或液氮凍存生物樣品。-80℃低于危害性較大的結(jié)晶溫度范圍,也是常用設(shè)備超低溫冰箱能達到的溫度解凍方式選擇?
37℃水浴解凍?(推薦快速復(fù)蘇場景)
適用樣本?:細胞凍存液
操作要點?:
凍存管需擰松管蓋防爆裂
,輕柔晃動至僅剩小塊冰塊時取出?;全程控制在1-2分鐘內(nèi)
,避免長時間高溫暴露?。室溫解凍?(限部分穩(wěn)定試劑)
僅適用于耐溫性強的試劑(如某些緩沖液)
,需邊觀察邊溶解,避免升溫?。4℃冷藏/冰浴解凍?(推薦敏感樣本)
適用樣本?:外泌體
、胎牛血清(FBS)、易沉淀蛋白?;優(yōu)點:減少熱應(yīng)激損傷,但耗時較長(需數(shù)小時至過夜)?
。隨著制冷技術(shù)的進步
,深低溫冰箱已經(jīng)出現(xiàn)在某些實驗室。這類冰箱制冷溫度可達到-150℃。它不需要像液氮罐那樣需要頻繁監(jiān)控液氮消耗情況。箱內(nèi)溫度也比較均勻恒定,但深低溫冰箱降溫速度低于液氮,一旦開啟取放樣品時容易造成較大范圍的溫度波動,溫度恢復(fù)時間也相對較長。另外深低溫冰箱能耗很大,且必須保障供電。注意事項?
避免反復(fù)凍融?:解凍后需分裝使用
,尤其是酶類、細胞樣本?;特殊樣本處理?:
胎牛血清(FBS)禁用37℃水浴
,易導(dǎo)致蛋白沉淀?;含NaN3的試劑需透析去除
,否則抑制HRP活性?;安全防護?:操作液氮凍存樣本時需戴護目鏡,防凍傷或管體炸裂?
。三
、替代方案?無水復(fù)蘇儀?:干式加熱(37℃恒溫),避免水浴污染
,適用于無菌要求高的場景?;梯度解凍?:對復(fù)雜樣本(如組織塊)可先4℃平衡
,再37℃快速終融?。注:以上資料僅供參考
,如需具體的完整說明,可參考品牌供應(yīng)商或咨詢技術(shù)老師。天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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