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Elisa實(shí)驗(yàn)：ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作流程
一
試劑平衡?
從2-8℃取出試劑盒
濃縮洗滌液若有結(jié)晶
耗材檢查?
核對(duì)試劑盒組分與說明書是否一致
未使用的板條需密封后冷藏保存?。
二
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需離心后加指定體積稀釋液溶解，渦旋混勻?
梯度稀釋建議使用1.5mL EP管
樣本預(yù)處理?
細(xì)胞上清需3000rpm離心10分鐘去除雜質(zhì)?
高濃度樣本需按說明書稀釋(如5倍)?。
三
孔位布局?
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔(梯度濃度)
加樣體積通常為50-100μL
孵育條件?
加入檢測(cè)抗體后
，37℃避光孵育1-2小時(shí)，震蕩(300rpm)可提高結(jié)合效率?。四
、洗滌與顯色洗板規(guī)范?
手工洗板：每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干
，重復(fù)3-5次，最后拍干?。自動(dòng)洗板機(jī)建議設(shè)置30秒浸泡程序?
。顯色控制?
底物(如TMB)需避光操作
，37℃孵育15-30分鐘，顯色至孔內(nèi)液體變藍(lán)?終止液加入后5分鐘內(nèi)需完成讀數(shù)(顏色變黃)?
五、數(shù)據(jù)讀取與分析
酶標(biāo)儀設(shè)置?
雙波長(zhǎng)檢測(cè)(主波長(zhǎng)450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?
使用CurveExpert或Excel擬合4參數(shù)曲線
六、注意事項(xiàng)
關(guān)鍵控制點(diǎn)?：
避免酶標(biāo)板長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫
不同批次試劑不可混用
異常處理?：
顯色過淺：檢查孵育時(shí)間或底物活性?
背景過高：洗滌不充分或抗體濃度過高?
(注：具體操作需以試劑盒說明書為準(zhǔn)，不同品牌可能存在細(xì)節(jié)差異?
BS-1502人內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
BS-2489小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
BS-3364大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
注：以上資料僅供參考
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