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以下是本生技術(shù)小編對(duì)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的規(guī)范詳解，結(jié)合雙抗體夾心法的通用流程及注意事項(xiàng)：
一
試劑平衡?
試劑盒從冰箱取出后，需室溫平衡20-30分鐘(避免溫度差異影響反應(yīng))?
設(shè)備校準(zhǔn)?
移液器需定期校準(zhǔn)，選擇密封性好的槍頭
二、加樣規(guī)范?
標(biāo)準(zhǔn)品與樣本處理?
標(biāo)準(zhǔn)品需按說(shuō)明書(shū)渦旋溶解，靜置10-30分鐘至溶解
樣本需離心(2000×g，15分鐘)去除顆粒物
加樣操作?
垂直懸空加液，避免貼壁或產(chǎn)生氣泡
，每孔加樣量需一致(如50μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本)?。建議設(shè)置復(fù)孔(至少2孔/樣本)
，提高數(shù)據(jù)可靠性?。三、孵育與洗滌?
孵育條件?
37℃恒溫箱孵育60分鐘(雙抗體夾心法)
，封板膜密封防止蒸發(fā)?。震蕩孵育可增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合效率(OD值更高)?。
洗滌步驟?
手工洗板：每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL)
，靜置1分鐘后拍干，重復(fù)5次?。機(jī)器洗板：檢查沖洗頭是否堵塞
，確保洗滌凈。四、顯色與檢測(cè)?
底物反應(yīng)?
加入TMB底物后避光孵育15分鐘
，顯色呈藍(lán)色?。終止液加入后5分鐘內(nèi)測(cè)定OD值(450nm)，避免延遲導(dǎo)致信號(hào)衰減?
。數(shù)據(jù)計(jì)算?
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)需線(xiàn)性良好(R2≥0.99)
，樣本濃度通過(guò)曲線(xiàn)方程計(jì)算?。五
、常見(jiàn)問(wèn)題與解決?問(wèn)題? ?可能原因? ?解決方案?
空白孔OD值過(guò)高 洗滌不凈或試劑污染 更換新鮮洗滌液
，重復(fù)洗板?平行孔CV值>10% 加樣誤差或孵育溫度波動(dòng) 校準(zhǔn)移液器，使用恒溫箱?
顯色不均勻 底物混合不充分 顯色前充分搖勻試劑?
六
、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?試劑保存?：未用完板條需密封干燥保存
，濃縮洗滌液結(jié)晶需37℃水浴溶解?。樣本稀釋?：若說(shuō)明書(shū)要求稀釋樣本(如5倍)
，最終結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)?。以上規(guī)范適用于多數(shù)ELISA試劑盒，具體操作需以試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)
注：以上資料僅供參考，具體其他信息請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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