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以下是關(guān)于人胃促生長素(Ghrelin)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合指南:
一、實(shí)驗(yàn)原理
雙抗體夾心法?:采用包被抗體的微孔板捕獲樣本中的Ghrelin,通過HRP標(biāo)記檢測抗體形成復(fù)合物
競爭法?(部分試劑盒):樣本中Ghrelin與標(biāo)記抗原競爭結(jié)合抗體,OD值與濃度呈負(fù)相關(guān)
二
類型?:血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)
采集要求?:
血清/血漿:4℃下3000轉(zhuǎn)離心10-30分鐘
組織樣本:需用生理鹽水勻漿后離心取上清。
保存?:2-8℃可存48小時(shí)
三
包被微孔板
部分試劑盒含生物素化抗體及鏈霉親和素-HRP
四、操作步驟
平衡試劑?:所有組分需室溫平衡15-30分鐘
加樣?:
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(如10-1280 ng/ml)
樣本按1:100稀釋(如10μl樣本+1ml稀釋液)。
孵育?:37℃溫育1小時(shí)
顯色?:加入TMB底物,避光反應(yīng)15分鐘
檢測?:酶標(biāo)儀450nm讀取OD值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度
五
質(zhì)量控制?:板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%,回收率需達(dá)81%以上
干擾避免?:
避免孔內(nèi)液體殘留影響洗滌效果
底物變藍(lán)或過期不可使用
保存條件?:未使用試劑2-8℃保存,避免強(qiáng)光照射
六
檢測范圍?:0.78-50 pg/mL(競爭法)或更高濃度(夾心法)。
靈敏度?:可達(dá)0.32 pg/mL
不同品牌試劑盒可能存在細(xì)節(jié)差異
天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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