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　　以下是?小鼠轉化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書(綜合多品牌參數(shù)及操作要點)：

　　BS-2006  小鼠轉化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒

　　一

、試劑盒組成?

　　組分 規(guī)格(96T/48T) 保存條件

　　預包被微孔板 8×12 strips / 8×6 4℃干燥

　　TGF-β2標準品 凍干粉(10,000pg/mL) 4℃(復溶后)

　　檢測抗體(生物素標記) 120μL/70μL 4℃避光

　　HRP標記鏈霉親和素 120μL/70μL 4℃避光

　　TMB顯色液 10mL/6mL 4℃避光

　　終止液(2M H?SO?) 10mL/6mL 室溫

　　二、實驗前準備?

　　樣本處理?

　　血清/血漿?：采集后1000×g離心25分鐘

，避免溶血或脂血。

　　細胞上清?：離心去除顆粒，分裝保存于-80℃(避免反復凍融)

。

　　組織勻漿?：按重量體積比1:9加入PBS勻漿

，離心取上清。

　　試劑平衡?

　　所有試劑及樣本需室溫平衡30分鐘(18-25℃)

，避免37℃直接溶解。

　　標準品稀釋?

　　復溶標準品后，用稀釋液梯度稀釋至5,000pg/mL→78pg/mL(7個濃度點)

，0pg/mL為空白對照。

　　三、實驗步驟(雙抗體夾心法)?

　　加樣?

　　每孔加入100μL標準品或樣本

，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌?

　　棄液后

，用洗滌液(PBST)洗板5次，拍干。

　　加檢測抗體?

　　每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋)

，37℃孵育60分鐘。

　　加酶結合物?

　　加入HRP標記鏈霉親和素(1:100稀釋)

，37℃避光孵育30分鐘。

　　顯色?

　　加TMB顯色液100μL/孔，避光反應15-20分鐘(顯藍色)

。

　　終止與讀數(shù)?

　　加50μL終止液(黃色)

，450nm波長測OD值(需在10分鐘內完成)。

　　四

、數(shù)據(jù)分析?

　　標準曲線繪制?

　　以標準品濃度為橫坐標

，OD值為縱坐標，擬合四參數(shù)邏輯曲線(R2>0.99)