以下是山羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合指南：

　　BS-6400 山羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒

　　一

、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)

。包被微孔中的捕獲抗體與樣本中的IL-1β結(jié)合后，依次加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)顯色反應(yīng)(TMB底物)后，通過(guò)450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，濃度與顏色深淺呈正相關(guān)。

　　二

、試劑盒組成?

　　微孔酶標(biāo)板?：預(yù)包被抗體的96孔板(可拆卸)

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉(通常含6-8個(gè)濃度梯度

，如10,000-156 pg/mL)，需用稀釋液復(fù)溶

　　檢測(cè)抗體?：HRP標(biāo)記的檢測(cè)溶液A/B

，需按1:100稀釋

　　洗滌緩沖液?：30倍濃縮液

，使用前需蒸餾水稀釋

　　顯色底物?：TMB(A/B液分裝，避光保存)

　　終止液?：2N H?SO?溶液

　　三

、樣本處理?

　　血清/血漿?：

　　采集后3000×g離心10分鐘(血清)或30分鐘(血漿

，需抗凝劑處理)

　　避免溶血或脂血，分裝保存于-20℃

，避免反復(fù)凍融

　　細(xì)胞上清/組織勻漿?：

　　離心去除顆粒(3000×g

，10分鐘)，取上清檢測(cè)

　　四

、操作步驟?

　　試劑平衡?：所有組分室溫平衡15-30分鐘

，濃縮洗滌液需溶解結(jié)晶(可水浴加溫)

　　加樣?：

　　空白孔：不加樣品

　　標(biāo)準(zhǔn)孔：50μL系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：先加40μL稀釋液

，再加10μL樣本(最終稀釋5倍)

　　溫育?：37℃孵育30分鐘，封板膜覆蓋

　　洗滌?：棄液體

，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)5次，拍干

　　加酶標(biāo)抗體?：每孔50μL HRP標(biāo)記抗體(空白孔除外)

　　顯色?：避光加入TMB A/B液各50μL

，37℃顯色10分鐘(藍(lán)色→黃色)

　　終止與檢測(cè)?：每孔加50μL終止液，立即用酶標(biāo)儀測(cè)450nm OD值

　　五

、注意事項(xiàng)?

　　質(zhì)量控制?：每次實(shí)驗(yàn)需做標(biāo)準(zhǔn)曲線及復(fù)孔

，批內(nèi)/批間CV應(yīng)<12%

　　干擾因素?：避免細(xì)菌污染(內(nèi)源性HRP導(dǎo)致假陽(yáng)性)、溶血或反復(fù)凍融

　　保存條件?：未使用的板條需密封防潮

，試劑2-8℃保存，禁止冷凍

　　六、結(jié)果計(jì)算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)

、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算后乘以稀釋倍數(shù)。若樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍