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人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書
BS-0083人瘦素(LEP)ELISA試劑盒
以下是綜合多個(gè)高可信度來源整理的人瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明書
，涵蓋實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及關(guān)鍵注意事項(xiàng)：一
、實(shí)驗(yàn)原理?采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
。純化的抗LEP抗體包被微孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本、生物素標(biāo)記抗體及HRP標(biāo)記親和素，形成復(fù)合物。TMB顯色后二
組分 規(guī)格/說明 保存條件
預(yù)包被微孔板 96孔 2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉(濃度梯度0.15-50ng/mL) -20℃
生物素標(biāo)記抗體 100μL(1:100稀釋) 2-8℃
HRP標(biāo)記親和素 100μL(1:100稀釋) 2-8℃
顯色劑A/B液 各6mL 避光2-8℃
終止液 6mL(2N H?SO?) 2-8℃
20×洗滌緩沖液 20mL 室溫(結(jié)晶需水浴溶解)
三
血清/血漿?
室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000×g，20分鐘)
血漿需EDTA/肝素抗凝，離心后取上清
組織勻漿?
按1:9(w/v)加入PBS勻漿
細(xì)胞上清?
直接離心(2000×g
保存條件?：-20℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融
。四
、操作步驟?試劑平衡?：從冰箱取出后室溫平衡20分鐘。
加樣?
標(biāo)準(zhǔn)品孔?：加入50μL梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品
。樣本孔?：加入10μL樣本+40μL樣本稀釋液
。溫育?
37℃孵育60分鐘，洗滌后加入生物素抗體
，再孵育30分鐘。顯色與終止?
TMB顯色15分鐘，加終止液后15分鐘內(nèi)測(cè)OD值
。五
、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?洗滌?：手工洗板需拍干
，自動(dòng)洗板機(jī)每孔加350μL洗滌液。顯色控制?：避免顯色時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致背景升高
。儀器校準(zhǔn)?：使用前確認(rèn)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)準(zhǔn)確性
。六、結(jié)果計(jì)算?
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)
、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計(jì)算。若樣本OD值超出范圍，需用稀釋液稀釋后重測(cè)注：以上資料僅供參考，本試劑盒僅用于科研
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