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人Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)ELISA試劑盒代測本生生物公司供應(yīng)：ELISA試劑盒,動(dòng)物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進(jìn)口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器。
本試劑盒僅供研究使用
檢測范圍： 96T
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清
、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)含量。實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)水平
。用純化的Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)，再與HRP 標(biāo)記的Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)濃度。試劑盒組成：
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶
7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶
9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份
11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)
人Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)ELISA試劑盒代測標(biāo)本要求
1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取
，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2. 不能檢測含 NaN3 的樣品
，因 NaN3 抑制胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)活性。操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支
60 ng/L5 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30 ng/L4 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15 ng/L3 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5 ng/L2 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.75 ng/L1 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑
然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部
量不觸及孔壁
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl
7. 溫育：操作同 3
8. 洗滌：操作同 5
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)
。11. 測定：以空白空調(diào)零
，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)人Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)ELISA檢測試劑盒操作程序總結(jié)：
計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)
即為樣品的實(shí)際濃度
人Ⅴ型膠原蛋白(Col-Ⅴ)ELISA檢測試劑盒注意事項(xiàng)
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器
4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線
5. 封板膜只限一次性使用
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9. 本試劑不同批號組分不得混用
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)
保存條件及有效期
1. 試劑盒保存：;2-8℃
2. 有效期：6 個(gè)月
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