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山羊激素敏感性脂肪酶(HSL)ELISA試劑盒本生生物公司供應:ELISA試劑盒,動物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器
。本試劑盒僅供研究使用
檢測范圍: 96T
使用目的:
本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關液體樣本激素敏感性脂肪酶(HSL)含量
。實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中激素敏感性脂肪酶(HSL)水平
。用純化的激素敏感性脂肪酶(HSL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入激素敏感性脂肪酶(HSL),再與HRP 標記的激素敏感性脂肪酶(HSL)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的激素敏感性脂肪酶(HSL)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中激素敏感性脂肪酶(HSL)濃度。試劑盒組成:
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標試劑 6ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶
7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶
9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份
11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個
標本要求
1. 標本采集后盡早進行提取
,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2. 不能檢測含 NaN3 的樣品
,因 NaN3 抑制胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)活性。操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋
。60 ng/L5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
30 ng/L4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
15 ng/L3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
7.5 ng/L2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
3.75 ng/L1 號標準品150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑
,其余各步操作相同)、標準孔然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)
量不觸及孔壁
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl
,空白孔除外。7. 溫育:操作同 3
。8. 洗滌:操作同 5
。9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl
,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零
,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。山羊激素敏感性脂肪酶(HSL)ELISA試劑盒
操作程序總結:
計算:
以標準物的濃度為橫坐標
,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù)即為樣品的實際濃度
山羊激素敏感性脂肪酶(HSL)ELISA檢測試劑盒注意事項
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔
5. 封板膜只限一次性使用
7. 嚴格按照說明書的操作進行
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理
9. 本試劑不同批號組分不得混用
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準
保存條件及有效期
1. 試劑盒保存:;2-8℃
2. 有效期:6 個月
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