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犬糖連抗原153(CA153)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用
檢測(cè)范圍：
96T
0.1U/ml - 5U/ml
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中糖連抗原 153(CA153)含量
。實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中犬糖連抗原 153(CA153)水平
。用純化的犬糖連抗原 153(CA153)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入糖連抗原 153(CA153)，再與 HRP 標(biāo)記的糖連抗原 153(CA153)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖連抗原 153(CA153)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中犬糖連抗原153(CA153)濃度。試劑盒組成
130 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7終止液6ml×1 瓶2
酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(8U/ml)0.5ml×1 瓶
3酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
4樣品稀釋液6ml×1 瓶
10說(shuō)明書1 份5
顯色劑 A 液6ml×1 瓶11
封板膜2 張6
顯色劑 B 液
6ml×1/瓶12
密封袋1 個(gè)
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取
，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)
，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品
，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
4U/ml
5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2U/ml
4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1U/ml
3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.5U/ml
2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.25U/ml
1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑
，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘
。4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體
，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去重復(fù) 5 次
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5
。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl
，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl
，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零
，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)
，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出
，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器
，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線
5. 封板膜只限一次性使用
6.底物請(qǐng)避光保存
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用
犬糖連抗原153(CA153)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書
保存條件及有效期
1.試劑盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6 個(gè)月
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