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微生物輔酶F420(F420)ELISA試劑盒
BS-4855 微生物輔酶F420(F420)ELISA試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T25μg/mL–850μg/mL
使用目的:本試劑盒用于測定牛血清,血漿及相關(guān)樣本中乳鐵蛋白(LF)含量。
實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中微生物輔酶F420(F420)水平
。用純化的輔酶F420(F420)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入輔酶F420(F420),再與HRP標(biāo)記的輔酶F420(F420)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的輔酶F420(F420)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中輔酶F420(F420)濃度。試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液
6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑
6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(1600μg/mL)
0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1瓶4樣品稀釋液
6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液
6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液
6ml×1/瓶12密封袋1個
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行
,提取后應(yīng)盡s快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品
,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支
,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。800μg/mL5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400μg/mL4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200μg/mL3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100μg/mL2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μg/mL1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜
,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl
,空白孔除外。7.溫育:操作同3
。8.洗滌:操作同5
。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl
,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)
。11.測定:以空白孔調(diào)零
,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):
計算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)
,OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。輔酶F420(F420) 注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用
,酶標(biāo)包被板開封后如未用完2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔
5.封板膜只限一次性使用
6.底物請避光保存
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9.本試劑不同批號組分不得混用
保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.
有效期:6個月
注:以上資料經(jīng)供參考
天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖