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細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6
(1)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇:
貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板
U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞
不同型狀的板子自然有不同用途
圓底的好像沒聽說過拿來養(yǎng)細(xì)胞。 圓底的通常是拿來做分析
(2)細(xì)胞培養(yǎng)常見問題與解答
問:我看到培養(yǎng)板有4、6
答:要根據(jù)你具體的實(shí)驗(yàn)要求
問:請(qǐng)問哪位高手知道Terasaki板是什么培養(yǎng)板,與普通細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?
答:Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究
細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface
問:我想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀,用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎?請(qǐng)問酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?
答:用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉
區(qū)別:酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)
(3)細(xì)胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題
細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作:細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則,各項(xiàng)操作要保證規(guī)范
問:96
答:1.蓋子很松,屬于半開放培養(yǎng)
2.凡事有利必有弊
就好像培養(yǎng)皿
我使用24孔板
使用前綜合考慮一下,充分使用所以的孔;如果只需要使用少數(shù)的孔可以只用一邊的
其實(shí)自己感覺只要注意無菌操作
,一般是不會(huì)污染的。操作時(shí)用幾塊玻片把板子一側(cè)墊高,不要把蓋子全打開,一般沒問題。(4)細(xì)胞分布不均及解決辦法
問:我的細(xì)胞接種培養(yǎng)板,細(xì)胞總是聚集在周邊部分
,該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細(xì)胞卻是聚集在中間,是不是板子的質(zhì)量問題啊?答:請(qǐng)問你的細(xì)胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者,而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話
,很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分,導(dǎo)致細(xì)胞中間少,四周多!自己可是試試!周邊一般是相對(duì)會(huì)多一點(diǎn)
,但是中間的數(shù)量也不會(huì)很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。大概是板子的質(zhì)量問題吧或者是不是鋪板時(shí)候的細(xì)胞密度太低了?我用的corning的板 。
一個(gè)好辦法:在你培養(yǎng)種板之前
,把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出,種入細(xì)胞時(shí)力量要輕,可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中,培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長(zhǎng)我今天把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里幾個(gè)小時(shí)
問:我在做原代培養(yǎng)時(shí)也遇到過這種情況,我一直以為培養(yǎng)皿鋪膠不均勻會(huì)導(dǎo)致這種現(xiàn)象
答:這種現(xiàn)象很正常呀
(5)6孔板接種和換液?jiǎn)栴}:
問:我的細(xì)胞傳代很正常
,但一種到六孔板里(不管加藥和對(duì)照),總有兩三個(gè)孔(隨機(jī))細(xì)胞長(zhǎng)得不好,很小,像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請(qǐng)各位指點(diǎn)答:可能跟你加液的溫度有關(guān)
。如果你細(xì)胞剛剛拿出來?yè)Q液加液,培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久,很容易細(xì)胞就會(huì)凍死了。建議你把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。另外
,跟你細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也有關(guān)。加藥之前的細(xì)胞可以用高點(diǎn)的血清濃度培養(yǎng)。保證細(xì)胞狀態(tài)良好。或者放在37度水浴鍋里孵育也可以,或者是培養(yǎng)板本身的問題
,你再換換其它培養(yǎng)板試試看。再有可能就是細(xì)胞狀態(tài)問題了,種板時(shí)的血清濃度調(diào)高試一下問:近幾天
,我用六孔培養(yǎng)板接種細(xì)胞,培養(yǎng)24小時(shí)后更換培養(yǎng)基,在更換培養(yǎng)基之前答:你可以看一下是不是培養(yǎng)板沒放水平
。有一回我也出現(xiàn)過這種情況。你的培養(yǎng)液如何
,如果培養(yǎng)液過期,細(xì)胞就不會(huì)貼壁。換一點(diǎn)新配制的培養(yǎng)液試一試。我也經(jīng)常碰到
,我想可能是板的問題,換一個(gè)牌子的板或換用培養(yǎng)瓶就沒問題了。不知樓主所需換液的培養(yǎng)板多不多
,換培養(yǎng)基的時(shí)候如果沒有注意風(fēng)機(jī)的影響,特別是所需換液的培養(yǎng)板很多時(shí),容易使細(xì)胞因風(fēng)吹失水而干縮破裂。如果如此,換液時(shí)應(yīng)該逐個(gè)培養(yǎng)板進(jìn)行,別怕浪費(fèi)吸管,注意操作的效率!(6)24孔板接種問題:
問:把細(xì)胞消化接種到24孔板之后
,已經(jīng)四天了,老是每孔的中間部分長(zhǎng)不滿,每天換液時(shí)都用PBS 清洗,第二天換液時(shí)都出現(xiàn)同樣的情況,每孔的邊緣長(zhǎng)的很好,中央大量死細(xì)胞?答:我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片
,在玻片上種植。每次換液都用PBS洗應(yīng)該是培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用
個(gè)人經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為這是物理問題:24孔板小
同時(shí)你所說的細(xì)胞周圍密而中間稀疏
1.培養(yǎng)液加得太少
2.細(xì)胞接種后震蕩太厲害了
細(xì)胞分布均勻與否有一點(diǎn)很關(guān)鍵,即每種細(xì)胞是有個(gè)體差異的
1.所有待接種的細(xì)胞懸液在種板前一定要用吸管混勻
。2.按資料記載
,24孔板的液體量為1ml,個(gè)人也覺得1ml的量足矣。3.接種時(shí)
,要慢慢加樣,且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭,這樣做對(duì)細(xì)胞均勻分布有一定效果。4.接種后直接放入培養(yǎng)箱讓細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)板這個(gè)新的環(huán)境
,個(gè)人認(rèn)為沒有必要在室溫放置一段時(shí)間。
注:僅供參考
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