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人成纖維細胞生長因子8（FGF-8）ELISA檢測試劑盒說明書
更新時間：2020-12-28瀏覽：1404次

人成纖維細胞生長因子8（FGF-8）ELISA檢測試劑盒說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

。往預先包被人成纖維細胞生長因子8（FGF-8）獲抗體的包被微孔中，依次加入標本
、標準品、HRP標記的檢測抗體
，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色
，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色
。顏色的深淺和樣品中的成纖維細胞生長因子8（FGF-8）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）
，計算樣品濃度
。

樣品收集

、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激

，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離
。

2.  血漿：EDTA

、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清
。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎

。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測

，請按次用量分裝，凍存于-20℃
，避免反復凍融
，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍
。

自備物品

    酶標儀（450nm）
    高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL

、2-20uL
、20-200uL
、200-1000uL
    37℃恒溫箱

操作注意事項

      試劑盒保存在2-8℃，使用室溫平衡20分鐘

。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶
，這屬于正常現(xiàn)象
，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
      實驗中不用的板條應立即放回自封袋中
，密封（低溫干燥）保存
。
      標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預處理后的樣本無需稀釋
，直接取10μL加樣即可。
      嚴格按照說明書中標明的時間
、加液量及順序進行溫育操作。
      所有液體組分使用充分搖勻
。

試劑盒組成：

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

無

標準品（160pg/ml）

0.6mL

0.6mL

按說明書進行稀釋

標準品稀釋液

6mL

3mL

無

樣本稀釋液

6mL

3mL

無

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

無

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

無

底物B

6mL

3mL

無

終止液

6mL

3mL

無

封板膜

2張

2張

無

說明書

1份

1份

無

自封袋

1個

1個

無


注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：160

、80
、40
、20
、10
、5pg/ml

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋

，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

      手工洗板：甩盡孔內液體

，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體
，在吸水紙上拍干
，如此洗板5次
。
      自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min
，洗板5次。

人成纖維細胞生長因子8（FGF-8）ELISA檢測試劑盒說明書

 

操作步驟

      從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條

，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
      設置標準品孔和樣本孔
，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
      待測樣本孔先加待測樣本10μL
，再加樣本稀釋液40μL；
      隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL
，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min
。
      棄去液體
，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液
，靜置1min，甩去洗滌液
，吸水紙上拍干
，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
      每孔加入底物A
、B各50μL
，37℃避光孵育15min。
      每孔加入終止液50μL
，15min內
，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中

，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標
，繪制出標準品線性回歸曲線
，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值

，大于等于0.9900
。

2.  靈敏度：低檢測濃度小于1.0 pg/ml。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應

。

4.  重復性：板內

、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃

，避光防潮保存
。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗

，否則所產生的切后果
，由實驗者承擔，本公司概不負責
。

2.   嚴格按照說明書操作

，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔
。

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