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本生知識大匯總：怎么樣正確的進行ELISA試劑盒的檢測
規(guī)格：96T 48T
用途：科研實驗(僅供實驗室研究使用)
保存：2-8℃。
有效期：6個月
結(jié)合物的制備
1. 戊二醛交聯(lián)法
戊二醛是一種雙功能團試劑
，它可以使酶與蛋白質(zhì)的氨基通過它而聯(lián)結(jié)。堿性磷酸一般用此法進行標(biāo)記。交聯(lián)方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中，反應(yīng)后即得酶標(biāo)記抗體。ELISA中常用的酶一般都用此法交聯(lián)
。它具有操作簡便、有效和重復(fù)性好等優(yōu)點。缺點是交聯(lián)反應(yīng)是隨機的，酶與抗體交聯(lián)時分子間的比例不嚴格，結(jié)合物的大小也不均一，酶與酶，抗體與抗體之間也有可能交聯(lián)，影響效果。在兩步法中，先將酶與戊二醛作用，透析除去多余的戊二醛后，再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。也可先將抗體與戊二醛作用2. 過碘酸鹽氧化法：本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的標(biāo)記常用此法
按以上方法制備的酶結(jié)合物一般都混有未結(jié)合物的酶和抗體。理論上
結(jié)合物制得后，在用作ELISA試劑前尚需確定其適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">。使用過濃的結(jié)合物
結(jié)合物的保存
酶標(biāo)抗體中的酶和抗體均為生物活性物質(zhì)
結(jié)合物的稀釋液
用于稀釋高濃度的結(jié)合物以配成工作液。為避免結(jié)合物在反應(yīng)中直接吸附在固相載體上
本生ELISA試劑盒試劑盒組成
標(biāo)本要求
1. 標(biāo)本采集后盡早進行提取
2. 不能檢測含NaN3的樣品
本生ELISA試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋
2. 加樣
分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘
。4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體
，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl
10. 終止：每孔加終止液50μl
11. 測定：以空白空調(diào)零
操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)
本生ELISA試劑盒注意事項
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶
，洗滌時不影響結(jié)果。3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性
，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線
，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用
，以避免交叉污染。6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行
，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8. 所有樣品
，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9. 本試劑不同批號組分不得混用
。洗滌液
在板式ELISA中
，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。酶反應(yīng)終止液
常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸
，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。陽性對照品和陰性對照品
陽性對照品和陰性對照品是檢驗試驗有效性的控制品
，同時也作為判斷結(jié)果的對照，因此對照品，特別是陽性對照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測標(biāo)本的組成相一致。以人血清為標(biāo)本的測定，對照品最好也為人血清，因為正常人血清在各種ELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底。由于大量正常人血甭較難得到，國外試劑盒中的對照品多以復(fù)鈣人血漿為原料，即在血漿中加入鈣離子包被用抗體
包被固相載體的抗體應(yīng)具有高親和力和高特異性
，可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養(yǎng)液。如免疫用抗原中含有雜質(zhì)(即便是極微量的)，在抗血清中將出現(xiàn)雜抗體，必須除去(可用吸收法)后才能用于ELISA，以保證試驗的特異性?div id="d48novz" class="flower left">包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度
包被的方式
將抗原或抗體固定在過程稱為包被。換言之
脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機溶劑中溶解后加入ELISA板孔中
，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?div id="d48novz" class="flower left">本生ELISA試劑盒洗板方法：
1. 手工洗板方法：吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙
2. 自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
本生ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
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