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小鼠胰島素酶聯(lián)免疫分析法怎樣計算
小鼠胰島素(INS)試劑盒(ELISA)使用說明書
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用
小鼠胰島素酶聯(lián)免疫實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
樣本處理及要求
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘
注:標本溶血會影響最后檢測結果
標本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負責
2. 實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性
4. 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。
5. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清
6. 某些天然蛋白或重組蛋白
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏差
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
小鼠胰島素酶聯(lián)免疫試劑盒組成
備注:
1. 標準品濃度依次為:40
2. 經過大量正常標本檢驗
注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果
。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體
。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值
。4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色
,已經變藍的底物液不能使用。5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果
。6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射
。7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上
。8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體
。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。9. 不能使用過期產品
。10. 如果可能傳播疾病
,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用
。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋
,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃
2. 設置標準品孔和樣本孔
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL
5. 棄去液體
6. 每孔加入底物A、B各50μL
,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL
,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標
,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能
1. 檢測范圍:1.25 mIU/L – 40 mIU/L
。2. 靈敏度:檢測濃度小于0.1 mIU/L。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應
。4. 重復性:板內變異系數(shù)小于10%
,板間變異系數(shù)小于15% 。說明
1. 由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析
,本產品可能存在一定的質量技術風險。2. 最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關
,請務必準備充足的標本備份。3. 不同批次的同一產品可能會有少許差別
,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據試劑盒內說明書進行實驗操作,網站電子版說明書僅作參考。4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果
問題解答
若實驗效果不好
小鼠胰島素(INS)試劑盒 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命