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本生解析：操作細胞系步驟以及小技巧
更新時間：2023-04-25瀏覽：1200次

　　本生解析：操作細胞系步驟以及小技巧


　　脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具

，已經(jīng)研究的十分廣泛
，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內(nèi)
。帶正電的陽離子脂質(zhì)體
，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中
，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物
，從而吸附到帶負電的細胞膜表面
，經(jīng)過內(nèi)吞被導入細胞。

　　一

、細胞系方法原理

　　細胞系方法主要包括：電穿孔法

、磷酸鈣沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
、病毒介導的轉(zhuǎn)染等
，理想的細胞轉(zhuǎn)染方法是具有高轉(zhuǎn)染效率、對細胞的毒性作用小等
，本文主要介紹細胞轉(zhuǎn)染常用的方法-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理和操作步驟等
。

　　優(yōu)點: 與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性

，它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中
，是目前條件下蕞方便的轉(zhuǎn)染方法之一。

　　二

、細胞系操作步驟

　　(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿

，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%
，密度過大
，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。

　　(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)

　　A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA

。

　　B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體

。

　　分別將A液與B液輕彈混勻

，靜置5分鐘。

　　(3) 吸取B液加入至A液中

，輕彈混勻
。室溫中置10-15分鐘。

　　(4) 轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次

，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液
。

　　(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻

，37℃溫箱置6~24小時
，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)
。

　　(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后

，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA
，驗證敲減/過表達效率
。

　　ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升

。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法
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